Efecto de citrato sódico y fosfato disódico sobre Escherichia coli verotoxigénica

Abstract

INTRODUCCIÓN: Escherichia coli verotoxigénico es un patógeno asociado a enfermedades transmitidas por alimentos. Los factores de virulencia principales de estas bacterias son la verotoxinas (VT1 y VT2) codificadas en fagos temperados. Estos fagos portadores de vt juegan un rol fundamental en la patogénesis de VTEC, tanto para la síntesis como para la liberación de las verotoxinas. La producción de VTs está ligada al ciclo de replicación del fago a través de la vía de respuesta SOS y, ciertas condiciones que conducen a la inducción de fagos (transición del estado lisogénico a expresión del ciclo lítico) incrementan la liberación de toxina. OBJETIVO: Evaluar el efecto de los aditivos utilizados en alimentos cárnicos, citrato sódico y fosfato disódico, sobre: ? crecimiento de VTEC y ? producción de fagos. MATERIALES Y MÉTODOS: Se realizaron cultivos en medio líquido de una cepa VTEC O157:H7 (portadora de vt1 y vt2) en presencia de diferentes concentraciones de citrato de sodio (0,5; 1 y 2,5%), de fosfato disódico (0,1; 0,5 y 1%) y en ausencia de los mismos. El control positivo de la inducción de fagos se realizó mediante cultivo en presencia de mitomicina C. Se construyeron curvas de crecimiento/lisis para cada cultivo a través de la medición de la densidad óptica (DO600) a intervalos de 1 hora durante un periodo de 5 horas a partir del agregado de los aditivos. Además se cuantificaron las unidades formadoras de colonia mediante siembra en placas con ágar LB. Se evaluó la producción de fagos (título) en los sobrenadantes por recuento de unidades formadoras de placas empleando como cepa indicadora E. coli DH5α, en los sobrenadantes de cultivo a las 3 horas post agregado de aditivos. RESULTADOS: Las curvas obtenidas mostraron una menor velocidad de crecimiento en los cultivos realizados en presencia de aditivos, con respecto al cultivo en ausencia de los mismos. En los cultivos con citrato, la velocidad de crecimiento bacteriano fue inversamente proporcional a las concentraciones utilizadas, mientras que en los cultivos con fosfato las diferencias en velocidad de crecimiento no fueron tan evidentes. No se observaron patrones bacteriolíticos en ninguno de los cultivos en presencia de conservantes. El número de placas de lisis obtenidas a partir de los sobrenadantes de los cultivos con aditivos fueron menores a los sobrenadantes de cultivos en ausencia de los mismos. CONCLUSIONES: Los aditivos citrato sódico y fosfato disódico afectan el crecimiento de la cepa VTEC estudiada. Sin embargo, no se evidenció inducción del ciclo lítico de los fagos codificantes de verotoxinas. El menor número de placas de lisis observado en los cultivos con aditivos, con respecto al control sin aditivo, podría deberse a un menor número de células bacterianas en el momento de análisis, o al efecto quelante de los mismos, el que podría interferir en la metodología de detección de los fagos.