Puesta a punto de la técnica de Western blot como prueba confirmatoria para la detección de anticuerpos séricos anti-Trichinella en porcinos

Abstract

La trichinellosis en porcinos tiene impacto directo en la economía y la salud pública. El objetivo del trabajo fue poner a punto la técnica de Western blot (WB) para la confirmación de sueros porcinos con resultado sospechoso o positivo al ELISA como una estrategia de diagnóstico de trichinellosis in vivo. Se utilizaron 27 sueros con reactividad conocida en ELISA, confirmada por digestión artificial (DA). Diecisiete sueros provenían de 2 cerdos infectados experimentalmente y muestreados a distintos tiempos post-infección (p.i.), 5 de animales de un foco y 5 procedentes de granjas modelos (controles negativos). El WB se basó, igual que el ELISA, en el antígeno de excreción-secreción de larvas musculares de T. spiralis (AgE/S). El AgE/S (66 µg) fue separado por SDS-PAGE al 12% y transferido a membrana de nitrocelulosa a voltaje constante. La membrana se bloqueó con PBS-T/leche descremada 5% a 37°C, 1h. Se cortaron tiras y se incubaron con los sueros (1/100) en PBS-T leche descremada 3%, 1h. Las tiras se lavaron con PBS-T y se incubaron con el anti-porcino IgG conjugado a peroxidasa (1/12500), durante 1h. La reacción se reveló con DAB+Tris/0,06% H2O2. La detección del triplete de bandas entre 40-60 kDa se interpretó como específico de la infección por Trichinella. En los sueros de los animales infectados experimentalmente la estrategia combinada resultó positiva a partir del día 21 p.i. En los sueros de cerdos de foco, dos muestras negativas a DA y positivas a ELISA, resultaron no reactivas en WB. Dos sueros asociados a cargas de 0,05 y 0,15 larvas/g, respectivamente reaccionaron en ELISA aunque sólo el último en WB. Un suero asociado a carga de 0,2 larvas/g fue negativo a ambas pruebas. La combinación ELISA+WB en serie aumentaría la especificidad del inmunodiagnóstico. Se aumentará el número de sueros porcinos caracterizados para mejorar la performance de esta estrategia diagnóstica.