Detección de Prototheca en muestras de leche de tanque mediante el uso del medio de cultivo Prototheca isolation medium (PIM)

Abstract

Introducción. El análisis de leche de tanque es una herramienta de gran utilidad a la hora de monitorear la calidad de leche de un tambo. Mediante la toma de muestras pareadas de leche de tanque y complementándolo con bacteriologías individuales se puede realizar un seguimiento y un diagnóstico de la calidad de leche de un establecimiento. El National Mastitis Council (NMC) establece los protocolos de trabajo para realizar estos seguimientos en los cuales detalla que medios de cultivo se deben utilizar para la búsqueda de cada patógeno o grupo de microorganismos en general. Dentro del protocolo de análisis de leche de tanque propuesto por el NMC no está detallada la utilización de un medio selectivo para la búsqueda de Prototheca como es el Prototheca isolation medium (PIM). Si bien el alga patógena Prototheca desarrolla en medios de cultivo comunes como el agar tripteína soja suplementado con 5% de sangre bovina, el medio PIM es un medio de cultivo selectivo que aumenta la sensibilidad de detección de este patógeno en leche. Por otro lado, debido a que esta alga puede provenir tanto de vacas infectadas como del ambiente es que no se le ha dado tanta utilidad a su búsqueda en leche de tanque. En el presente trabajo, se reporta el uso del medio de cultivo PIM para la detección de Prototheca a partir del cultivo de leche de tanque y se evalúa la utilidad del screening de este microorganismo en leche de tanque para la posterior búsqueda de Prototheca en muestras individuales de leche de cuartos mamarios de vaca.Materiales y Métodos. Las muestras de leche de tanque y de cuartos provienen de 30 tambos ubicados en la Cuenca Mar y Sierras y alrededores. Estas fueron analizadas en un laboratorio privado durante los años 2019, 2020 y 2021 (enero a julio). La mayoría de estos tambos remite mensualmente una muestra de leche de tanque y a su vez muestrean toda vaca que se detecta con mastitis clínica y gran parte de las que presentan mastitis subclínica según el recuento de células somáticas del control lechero o el resultado del California Mastitis test (CMT). Por lo tanto, las muestras de leche de cuartos (pool o individuales) provienen de vacas con mastitis clínica o subclínica.Al protocolo estándar de cultivo de muestras de tanque establecido por el NMC se añadió el cultivo de las muestras de leche en el medio PIM. Se sembraron 50 µl en superficie, se incubó a 37°C en atmósfera aerobia y a las 24 - 48 h se registró el desarrollo de colonias características (Figura 1). A continuación, se realizó la identificación de Prototheca por coloración con azul de metileno y observación microscópica de acuerdo a lo descripto por la bibliografía de referencia (Figura 2).Figura 1. Colonias de Prototheca en medio PIMLas muestras de leche de cuartos se sembraron (10 µl) en agar tripteína soja suplementadas con 5% de sangre bovina de acuerdo a los establecido en los protocolos del National Mastitis Council. Figura 2. Morfología de Prototheca. Coloración con azul de metileno (100x)Resultados. De un total de 30 tambos que remitieron leche de tanque, 6 tambos tuvieron aislamiento positivo en más de un tanque remitido y 24 tambos fueron negativos. Del total de los tambos positivos a Prototheca en sus leches de tanque (6), todos tuvieron al menos un cultivo positivo en muestras de leche individuales. Por otro lado, en ningún tambo negativo a Prototheca en leche de tanque mediante la siembra en PIM (24) se pudo identificar Prototheca en muestras individuales de leche remitidas, ya sea de vacas con mastitis clínica (MC) o mastitis subclínica (MSC).Discusión y Conclusión. En este estudio el 100 % de los tambos positivos a Prototheca en sus leches de tanque fueron positivos en al menos un animal a Prototheca (ya sea por mastitis clínica o subclínica). Por lo tanto, la presencia de Prototheca en leche de tanque se relaciona con la presencia de Prototheca en leche de cuartos mamarios. Esto indica que el hallazgo en leche de tanque es un fuerte indicador de búsqueda en vacas individuales y no se relacionaría con una contaminación ambiental exclusiva. Estos resultados resaltan la utilidad de implementar de rutina el uso del medio PIM para la detección de la presencia de Prototheca en leche de tanque. Es importante destacar que el cultivo de leche de tanque no debe ser utilizado como una técnica de diagnóstico única dado que es necesario realizar la correlación de estos resultados con observaciones a campo y otros análisis de laboratorio, tales como el recuento de células somáticas y cultivos de muestras de leche de vacas individuales. En conclusión, el uso de rutina del medio PIM se propone como una estrategia de monitoreo y control de Prototheca en rodeos lecheros. Por último, también se recomienda el cultivo de muestras ambientales en un intento por determinar otras fuentes de contagio de estos microorganismos.