Estudiando proteínas con función desconocida en kinetoplástidos: TcCAL1 y su rol en el ciclo de vida de T. cruzi

Abstract

En Trypanosoma cruzi, el calcio juega un papel importante en los procesos de invasión a la célula hospedadora y en la metaciclogénesis. TcCAL1 es una proteína sin función conocida y exclusiva de kinetoplástidos, que posee dos dominios EF-hand para la unión a Ca2+. En este trabajo, estudiamos el rol de TcCAL1 en algunos procesos del ciclo de vida de T. cruzi. Se encontró que la sobreexpresión de la proteína de fusión TcCAL1x6His inhibe la diferenciación de epimastigotes (E) a tripomastigotes metacíclicos (TM). Esto podría ocurrir debido al secuestro de Ca2+ citosólico por TcCAL1x6His, lo que disminuye los niveles del ion en la célula, afectando negativamente la metaciclogénesis. También, observamos que la sobreexpresión de TcCAL1x6His provocó un aumento en los índices de adhesión e infección de TM a células Vero. Este resultado, sumado al hallazgo que los niveles de expresión de TcCAL1 endógena son mayores en tripomastigotes (T), respecto a amastigotes axénicos (Ax) o E, sugiere que esta proteína está involucrada en los procesos de invasión del parásito a la célula hospedadora. No obstante, los mecanismos por los cuales TcCAL1 promueve la virulencia del parásito se mantienen en estudio. Por otro lado, lasobreexpresión de TcCAL1x6His no afectó las tasas de proliferación de E, así como tampoco laamastigogénesis in vitro. Ensayos de microscopía de inmunofluorescencia, mostraron que TcCAL1se localiza en todo el cuerpo celular en amastigotes (A), T y E. Mediante ensayos de doble híbrido en levaduras y coinmunoprecipitación, se identificaron proteínas que interaccionan con TcCAL1 que tienen dominios tipo prefoldina o armadillo, aún no caracterizadas en el parásito. Se profundizará en el estudio del entorno molecular, citosólico y asociado a membrana, de TcCAL1. Se estudiará la unión de Ca2+ a TcCAL1 y los niveles de Ca2+ intracelular en los parásitos transgénicos, así como también el efecto del silenciamiento del gen tccal1 en el ciclo de vida de T. cruzi.