Bacteriófagos para el control de STEC O157:H7

Abstract

Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC) representa uno de los principales agentes causales de enfermedades transmitidas por alimentos con mayor relevancia en Argentina. El serotipo O157:H7 es el que se aísla con mayor frecuencia, siendo detectado en el 58% de los casos de síndrome urémico hemolítico según el último informe del Ministerio de Salud. Es así que resulta apremiante desarrollar herramientas para el control del mismo. En relación a esto, los fagos, predadores naturales de bacterias, han comenzado a ganar importancia para el biocontrol de bacterias patógenas en la industria alimentaria. Los fagos son reconocidos por su especificidad de hospedador, que generalmente depende de las fibras o las espículas de la cola, las cuales determinan el tipo de receptor bacteriano al que podrán unirse. Según estudios previos, es posible mejorar la capacidad de adsorción de los fagos mediante su entrenamiento con el hospedador de interés.Nuestro objetivo fue detectar y aislar fagos efectivos contra STEC O157:H7 a partir de muestras recolectadas de materia fecal bovina, bebederos y efluentes de tambos. Luego de un pre-cultivo de las muestras, se realizó un screening del efecto lítico sobre STEC O157:H7 mediante la técnica de spot test. Posteriormente, se purificaron los fagos a partir de las muestras positivas, por el método de la doble capa de agar. Se preparó un stock de alto título de cada fago purificado, el cual se utilizó para determinar la presencia/ausencia del gen stx2 por PCR y evaluar el efecto sobre 3 cepas O157:H7 mediante spot test. En uno de los casos, que mostraba una baja producción de placas de lisis sobre una de las cepas, se buscó potenciar el efecto mediante un protocolo de entrenamiento basado en una serie de pasajes consecutivos sobre dicha cepa.Del total de 29 muestras, 12 tuvieron efecto lítico sobre STEC O157:H7 en el screening y permitieron aislar 13 fagos. Con la mayoría de ellos, se obtuvieron placas de lisis al menos sobre 2 de las cepas O157:H7 y resultaron negativos para stx2. En el caso del fago enfrentado con una cepa O157:H7 para mejorar su eficiencia se observó que tras 4 pasajes las placas de lisis obtenidas tenían mayor turbidez. Este estudio permitió aislar un importante número de fagos del ambiente de tambos con actividad lítica contra STEC O157:H7. Si bien los fagos obtenidos no son portadores del gen stx2, son necesarios más análisis para garantizar la seguridad de su empleo como agentes de biocontrol. En los casos que se requiera el aumento de la eficiencia de alguno de los fagos, se deberán probar nuevas estrategias, sin embargo, la alta proporción de fagos efectivos que se pudieron aislar asegura una prometedora herramienta para control de STEC O157:H7.