Criopreservación de espermatozoides de llama obtenidos del conducto deferente utilizando tres curvas de congelamiento

Abstract

El objetivo del estudio fue determinar el efecto de tres curvas de congelación sobre la viabilidad pos-descongelación de espermatozoides colectados del conducto deferente de llamas. Se utilizaron seis llamas machos con desviación quirúrgica de los conductos deferentes. Las muestras de los seis machos se mezclaron para su procesamiento (pools) y se diluyeron con Tris-yema de huevo. Se procedió al enfriamiento hasta los 5 °C donde se completó la dilución (dilutor con glicerol) y se mantuvo por media hora (fase de equilibrio). Las muestras en pajillas de 0.25 ml fueron sometidas a congelamiento utilizando una tasa de descenso de temperatura de -20°C/min hasta llegar a -80°C (TI), a -100 °C (TII) y a -120 °C (TIII) en 4, 5 y 6 minutos, respectivamente, para finalmente almacenarlas en nitrógeno líquido. Las muestras fueron colectadas durante tres meses (n=19 pooles). Se determinó la motilidad total (motilidad progresiva, circular, oscilatoria), viabilidad y funcionalidad de membrana luego de la colecta, en la fase de equilibrio y al descongelamiento. Se observó una disminución significativa (p˂0.05) en todas las características espermáticas evaluadas en las muestras equilibradas respecto a las muestras luego de la colecta. Se obtuvo una correlación alta positiva entre viabilidad y motilidad total (r2=0.78) y en fase de equilibrio entre funcionalidad de membrana y motilidad total (r2=0.881) En las muestras descongeladas, la motilidad total y viabilidad fueron significativamente mayores en las muestras congeladas con la curva de congelamiento TIII respecto al TI (p=0.041 y p=0.003, respectivamente). No se observaron diferencias significativas en la funcionalidad de membrana entre las tres curvas de congelamiento (p˃0.27). En conclusión, la curva de descenso de la temperatura hasta los -120 °C utilizando una tasa de -20 °C/min sería la más adecuada para criopreservar espermatozoides de llama obtenidos a partir de la desviación de los conductos deferentes.

The aim of this study was to determine the effect of three freezing curves on the post-thaw viability of spermatozoa collected from the vas deferens of llamas. Six male llamas with surgical diversion of the vas deferens were used. The samples of the six males were mixed for processing (pools) and diluted with Tris-egg yolk. Cooling was carried out to 5 °C where the dilution was completed (dilutor with glycerol) and was maintained for 30 minutes (equilibrium phase). Samples in 0.25 ml straws were subjected to freezing using a temperature drop rate of -20°C/min until reaching -80°C (TI), -100°C (TII) and - 120°C (TIII) in 4, 5 and 6 minutes, respectively, to finally store them in liquid nitrogen. The samples were collected for three months (n=19 pools). Total motility (progressive, circular, oscillatory motility), viability and membrane functionality were determined after collection, in the equilibrium phase and upon thawing. A significant decrease (p<0.05) was observed in all the sperm characteristics evaluated in the samples after the equilibrium compared to the samples after collection. A high positive correlation was obtained between viability and total motility (r2=0.78) and in the equilibrium phase between membrane functionality and total motility (r2=0.881). In thawed samples, total motility and viability were significantly higher in frozen samples. with the freezing curve TIII with respect to TI (p=0.041 and p=0.003, respectively). No significant differences in membrane functionality were observed between the three freezing curves (p>0.27). In conclusion, the temperature drop curve down to -120 °C using a rate of -20 °C/min would be the most suitable for cryopreserving llama spermatozoa obtained from the deviation of the vas deferens.