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dc.contributor.author
Vilchez Larrea, Salomé Catalina
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dc.contributor.author
Prego, Alejo Facundo
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dc.contributor.author
Schoijet, Alejandra Cecilia
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dc.contributor.author
Llanos, Manuel
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dc.contributor.author
Alberca, Lucas Nicolás
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Bellera, Carolina Leticia
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dc.contributor.author
Gavernet, Luciana
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dc.contributor.author
Talevi, Alan
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dc.contributor.author
Alonso, Guillermo Daniel
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dc.date.available
2023-09-18T11:33:52Z
dc.date.issued
2022
dc.identifier.citation
A versatile CRISPR/Cas9 editing approach in Trypanosoma cruzi; XI Congreso de la Sociedad Argentina de Protozoología; Mendoza; Argentina; 2022; 124-124
dc.identifier.issn
1669-8991
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/211753
dc.description.abstract
Development of CRISPR/Cas9 as a tool for genomic edition brought a new perspective to the study of Trypanosoma cruzi, an organism usually reluctant to other gene editing technologies. Most often, epimastigotes are co-transfected with a single plasmid bearing both the gene for Cas9-GFP expression and a sequence to be translated into a single guide RNA (sgRNA), jointly with a lineal donor DNA encompassing a selection marker flanked by sequences homologous to the target gene. Here, we tested an alternative approach for the generation of Phosphodiesterase (PDE) knockout parasites. We obtained epimastigotes from Tul II strain stably expressing Cas9-GFP in the nucleus in all parasite stages, with no detrimental effects on epimastigote growth or differentiation nor on trypomastigote infection capability. These Cas9-GFP epimastigotes were co-transfected with the sgRNA + DNA donor pair, according to the intended gene target. sgRNA were obtained by in vitro transcription using a template DNA bearing the specific + scaffold sequence under a T7 promoter. To obtain the donor DNA we designed a "pre-donor" formed by a sequence including several restriction enzyme recognition sites flanked by 30-bp arms homologous to the sequence adjacent sgRNA annealing target. This "pre-donor" allowed to easily generate a variety of donor DNAs by cloning alternative selection markers. DNA extracts (boiling-preps) from 4-day post-transfection cultures were evaluated by PCR using "mixed" primer pairs: while one of the primers annealed to the target gene, the second primer annealed to a sequence in the donor DNA, allowing assessment of its correct insertion in the gene of interest. Advantages of this take on CRISPR/Cas9 edition include its versatility for choosing and switching between alternative selection markers and a quick and affordable generation of the components of the system and analysis of the transfected cultures, while possibly facilitating complementation assays on the KO lines.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
spa
dc.publisher
Universidad Nacional de Cuyo
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dc.rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject
Chagas disease
dc.subject
Trypanosoma cruzi
dc.subject
CRISPR/Cas9
dc.subject.classification
Bioquímica y Biología Molecular
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dc.subject.classification
Ciencias Biológicas
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dc.subject.classification
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
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dc.title
A versatile CRISPR/Cas9 editing approach in Trypanosoma cruzi
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type
info:eu-repo/semantics/conferenceObject
dc.type
info:ar-repo/semantics/documento de conferencia
dc.date.updated
2023-09-15T12:40:26Z
dc.journal.volume
18
dc.journal.number
Especial
dc.journal.pagination
124-124
dc.journal.pais
Argentina
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dc.journal.ciudad
Mendoza
dc.description.fil
Fil: Vilchez Larrea, Salomé Catalina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
dc.description.fil
Fil: Prego, Alejo Facundo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
dc.description.fil
Fil: Schoijet, Alejandra Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
dc.description.fil
Fil: Llanos, Manuel. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencas Exactas. Laboratorio de Investigación y Desarrollo de Bioactivos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina
dc.description.fil
Fil: Alberca, Lucas Nicolás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencas Exactas. Laboratorio de Investigación y Desarrollo de Bioactivos; Argentina
dc.description.fil
Fil: Bellera, Carolina Leticia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencas Exactas. Laboratorio de Investigación y Desarrollo de Bioactivos; Argentina
dc.description.fil
Fil: Gavernet, Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencas Exactas. Laboratorio de Investigación y Desarrollo de Bioactivos; Argentina
dc.description.fil
Fil: Talevi, Alan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencas Exactas. Laboratorio de Investigación y Desarrollo de Bioactivos; Argentina
dc.description.fil
Fil: Alonso, Guillermo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://bdigital.uncu.edu.ar/app/navegador/?idobjeto=17095
dc.conicet.rol
Autor
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dc.coverage
Internacional
dc.type.subtype
Congreso
dc.description.nombreEvento
XI Congreso de la Sociedad Argentina de Protozoología
dc.date.evento
2022-03-16
dc.description.ciudadEvento
Mendoza
dc.description.paisEvento
Argentina
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dc.type.publicacion
Journal
dc.description.institucionOrganizadora
Sociedad Argentina de Protozoología
dc.source.libro
Libro de resumenes del XI Congreso de la Sociedad Argentina de Protozoología
dc.source.revista
Revista Médica Universitaria
dc.date.eventoHasta
2022-03-18
dc.type
Congreso
Archivos asociados