Implementación de RT-LAMP para la detección de Strawberrymottle virus en Argentina

Abstract

Strawberrymottle virus (SMoV) es uno de los virus más importantes a nivel mundial enel cultivo de frutilla. La técnica de detección utilizada en Argentina para el diagnósticode SMoV es la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción reversa (RT-PCR). El diagnóstico del virus mediante esta técnica presenta dificultades, ya que escompleja y costosa. Recientemente, en China, SMoV fue detectado por amplificaciónisotérmica mediada por bucles (loop-mediatedisothermalamplificationassay, LAMP),cuyas principales ventajas son la alta sensibilidad, detección rápida y fácilfuncionamiento. El objetivo de este trabajo fue implementar la RT-LAMP para eldiagnóstico de SMoV en el cultivo de frutilla en Argentina. Se extrajeron los ácidosnucleicos totales por el método CTAB con modificaciones de dos plantas negativas yocho plantas positivas por RT-PCR a SMoV. Se utilizaron cebadores FIP/BIP F3/B3 yapublicados para la detección del virus, Bst DNA polimerasa (NEB) y AMV (Promega)para la transcripción reversa. La reacción se incubó durante una hora a 62oC y se tiñócon 1ul de SYBR Green I (Invitrogen).Además, 5 ul de producto de cada reacción secorrió por electroforesis en un gel de agarosa 1%. Los resultados mostraronfluorescencia en las plantas positivas a SMoV previamente testeadas y amplicones enel gel de agarosa. La RT-LAMP se implementó exitosamente y fue específica paraSMoV, con lo cual se recomienda su utilización como herramienta práctica para elrápido diagnóstico en muestras de campo, y para el control de producción de materiallibre de virus en el país.