La actividad de la monoacilglicerol lipasa asociada al segmento externo de los bastones retinianos es regulada por las proteínas involucradas en el proceso de fototransducción

Abstract

Objetivos: Determinar si la actividad de la monoacilglicerol lipasa (MAGL) del segmento externo de los bastones (ROS) era modulada por las proteínas involucradas en el proceso de fototransducción.Materiales y métodos: La actividad enzimática fue ensayada en las membranas de los ROS tratados con buffers de diferente fuerza iónica, empleando como sustrato monoacilglicerol radiomarcado. Los ROS fueron aislados y purificados de retinas bovinas previamente adapta-das a oscuridad. Estos fueron resuspendidos en buffer Tris-HCL 5 mM (remueve proteínas solubles y periféricas) o Tris-HCL 100 mM (remueve proteínas solubles) a pH 7,4 y expuestos a 3000 luxes por 30 minutos a 25°C (ROS B) o mantenidos en oscuridad a 4°C (ROS O). Luego, los ROS fueron pasados 15 veces por aguja G25x5/8 y centrifugados a 50000xg durante 15 minutos para obtener la fracción de membrana. Las pro-teínas fueron resueltas por electroforesis y visua-lizadas por tinción con Coomassie blue.Resultados: El tratamiento a 5 mM en oscuri-dad extrajo las proteínas: fosfodiesterasa (PDE), rodopsina quinasa (RK), transducina (Tα) y parte de la arrestina; mientras que el mismo tra-tamiento en luz produjo la extracción de todas ellas excepto la Tα. El tratamiento a 100 mM en oscuridad o luz extrae totalmente la RK y en alta proporción a la arrestina. La actividad MAGL en membrana de ROS O y ROS B (5 mM) dismi-nuyó 27% y 18%, respectivamente, en relación a la observada en el ROS (O/B) entero.Conclusión: Estos resultados podrían sugerir un estímulo de la PDE sobre la actividad de la MAGL, ya que en su ausencia la actividad de esta disminuye.