Efecto anti-inflamatorio de un postbiótico en inflamaciones oculares

Abstract

La uveítis describe un grupo de afecciones caracterizadas por inflamación intraocular, es la tercera causa principal de ceguera en el mundo y puede afectar a personas de cualquier edad. La administración local de corticosteroides es la estrategia terapéutica estándar; sin embargo, su uso a largo plazo está asociado a la formación de cataratas y al desarrollo de glaucoma. Esto motiva la búsqueda de terapias alternativas o fármacos coadyuvantes que permitan disminuir las dosis utilizadas habitualmente. En los últimos años el empleo de microorganismos no-viables, sus metabolitos y/o sus componentes celulares, a los que se denominan postbióticos, ha adquirido una gran relevancia, ya que administrados en cantidades adecuadas ejercen efectos benéficos para la salud. Previamente demostramos que el sobrenadante generado a partir de un cultivo de Lactiplantibacillus plantarum CRL 759 en medio DMEM posee propiedades anti-inflamatorias en un modelo in vivo de uveítis inducida por endotoxina en ratones C57BL/6. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto anti-inflamatorio in vitro del sobrenadante generado por el cultivo de L. plantarum en un buffer fosfato modificado según Sorensen suplementado con 2 g/L de glucosa, al que se denominó Postbiotic-drops 21 (PBD-21). L. plantarum CRL 759 se cultivó en buffer Sorensen a 37ºC y 5% CO2 durante 2,4, 6, 8 y 12 horas; los respectivos sobrenadantes se obtuvieron mediante filtración con membranas de 0,22 µm una vez cumplido el tiempo de incubación. Se determinaron el pH, la concentración de glucosa y el crecimiento bacteriano en todas las condiciones, sin encontrarse diferencias importantes durante los períodos de tiempo ensayados. El efecto anti-inflamatorio de PBD-21 se investigó empleando células RAW 264-7. La citotoxicidad se determinó mediante el ensayo de MTT, y se midió la capacidad de disminuir la producción de óxido nítrico (NO) por las células RAW 264-7 desafiadas con LPS como estímulo proinflamatorio. Se demostró que una dilución 1:2 del sobrenadante obtenido tras 4 horas de incubación no ejerció efectos tóxicos y redujo de manera significativa la producción de NO, obteniendo de esta manera lascondiciones óptimas para generar el PBD-21. La estimulación con LPS aumentó la producción de IL-6, TNF-α y NO por las células RAW 264-7, mientras que el pre-tratamiento con PBD-21 disminuyó significativamente los niveles de estos parámetros inflamatorios. Por otro lado, se investigó la estabilidad de PBD-21 a distintas temperaturas y tiempos. Se conservó a temperatura ambiente, 4°C y -20°C durante 7, 15 y 30 días, y se determinó la variación de pH, esterilidad y su efecto sobre la producción de IL-6 y NO. El lote conservado a -20°C disminuyó en mayor medida los niveles de los parámetros medidos, manteniendo las condiciones de esterilidad y pH. El análisis estadístico se realizó mediante ANOVA-Tukey (GraphPad Prism 8). Los resultados demuestran que: L. plantarum CRL 759 crecido en buffer Sorensen suplementado con glucosa, produce componentes anti-inflamatorios en el sobrenadante. Este medio mantiene un pH y una isotonicidad apropiados para una formulación oftálmica. Se sientan las bases para el desarrollo de un postbiótico con potencial aplicación como terapia adyuvante para trastornos inflamatorios oculares.