Producción de delta-endotoxina y enzimas hidrolíticas en dos medios de cultivo utilizando bacillus thuringiensis rt para el control de Spodoptera Frugiperda

Abstract

Introducción: Los biopesticidas elaborados en base a Bacillus thuringiensis (Bt) son una opción para el control de plagas para la agricultura, forestales y salud pública. Esta bacteria produce proteínas entomopatógenas (delta-endotoxinas) y también enzimas hidrolíticas que además de aumentar su patogenicidad hacia insectos blanco podrían ser aprovechadas en la industria.Objetivo: Evaluar la producción de delta-endotoxina y enzimas hidrolíticas de Bt RT en dos medios de cultivo.Materiales y métodos: Se utilizó el aislamiento nativo Bt RT, cultivado en medio Luria Bertani o en medio M5 (formulado a partir de residuos agroindustriales), usando fermentador Infors volumen de trabajo 3L. Se estimó la producción de delta-endotoxinas cada 24 h durante 5 días por el método de solubilización en condiciones alcalinas usando la técnica de Bradford. Para detectar las actividades hidrolíticas se sembraron 10 µl de sobrenadante de cultivo en pocillos realizados en LB agar (1,5%), pH7, conteniendo los diferentes sustratos: almidón, carboximetilcelulosa, leche en polvo, xilano de bagazo, pectina, quitina coloidal. Se incubó durante 24 h a 30ºC. Los halos de hidrólisis se revelaron con vapores de iodo. Cada ensayo se realizó por duplicado. El producto obtenido en ambos medios se probó con larvas de estadío III de Spodoptera frugiperda biotipo maíz, con dieta y plantines de Zea mays.Resultados y conclusiones: A los 5 días se alcanzó una concentración estimada de delta-endotoxina de 155,67 mg/L en LB y de 664,32 mg/L en M5. En cuanto a las actividades hidrolíticas, los diámetros (mm) de halos observados al 5 día fueron los siguientes: para amilasa (LB: 0,00, M5: 2,232), carboximetilcelulosa (LB: 0,466, M5: 7,97), proteasa (LB: 1,12, M5: 2,29), quitinasa (LB: 0,50, M5: 8,86), y xilanasa (LB: 0,00, M5: 6,21). No se detectó actividad en ambos medios para lipasa y pectinasa. Con respecto a la efectividad del formulado M5 fue de 100% tanto en dieta como en plantines, mientras que la efectividad con medio LB fue 61,40% y 58,33%, respectivamente.Financiado por proyecto PIP 297 y CIUNT 26/D409.