Derivados de 4-amino-2-fenilquinazolina con actividad antiviral para el virus de la diarrea viral bovina

Abstract

Introducción y Objetivos: El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) es un ARN virus del género Pestivirus (Flaviviridae) cuyas infecciones están distribuidas mundialmente y afectan principalmente al ganado bovino. Su control se basa en la vacunación (no obligatoria) y remoción de animales con infección persistente (fuente principal de virus). El uso de antivirales podría servir como herramienta complementaria de control para reducir las pérdidas económicas causadas por BVDV. Dado que la ARN polimerasa dependiente del ARN (RdRp) viral es esencial para la replicación de BVDV, es un blanco atractivo para el descubrimiento de antivirales. Las Quinazolinas son heterociclos que presentan diferentes actividades farmacológicas, como actividad antiviral, por ejemplo, como inhibidor de la RdRp del virus del Dengue. En el marco de la búsqueda de antivirales para BVDV, seleccionamos una serie de compuestos utilizando la metodología del screening in silico basado en la interacción con la estructura de la RdRp de BVDV (NS5B). Cinco de ellos resultaron activos y el compuesto 1 (CE50= 9,68 ± 0,49 µM), una 4-amino-2-fenilquinazolina, fue elegido para su optimización. Materiales y Métodos: Para mejorar su perfil de actividad antiviral y caracterizar la relación estructuraactividad, se sintetizaron 26 nuevos derivados de 1. Se evaluó la citotoxicidad en células MDBK por el método MTS / PMS y luego la actividad anti-BVDV (NADL) mediante la reducción del efecto citopático viral, determinándose la concentración citotóxica 50 (CC50) y la concentración efectiva 50 (CE50), respectivamente.Resultados: Hasta el momento, al menos seis derivados presentan una mayor actividad antiviral que el compuesto 1, con valores de CE50 entre 1,37 y 4,57 μM y mayor IS. Con el objetivo de confirmar el blanco de acción de estas quinazolinas, uno de los derivados más activos (1.9) fue evaluado frente a dos mutantes resistentes a la 5,6-TSC, un inhibidor no nucleosídico de la RdRp de BVDV. Como resultado, la mutante BVDV R1 (NS5B A392E) fue parcialmente resistente mientras que BVDV R2 (NS5B N264D) fue sensible a la acción del compuesto 1.9 como el virus wt. Si bien el sitio de interacción de las quinazolinas con la RdRp de BVDV no estaría delimitado por dichos aminoácidos, la presencia de la mutación en A392 afectaría su actividad antiviral in vitro, lo cual refuerza los resultados in silico y permitiría confirmar a la RdRp como blanco de acción de estos nuevos antivirales para BVDV. Se están realizando ensayos de curva de agregado de 1.9 para evaluar su efecto sobre la síntesis de ARN viral. Conclusiones: En conclusión, la caracterización biológica preliminar de estos compuestos complementa los ensayos in silico y permitiría confirmar su actividad como inhibidores de la RdRp de BVDV. Los resultados obtenidos permitirán definir la relación estructura-actividad de estos nuevos derivados de la Quinazolina 1. A partir de las modificaciones químicas realizadas, se espera encontrar un nuevo compuesto líder que pueda ser optimizado en el futuro para obtener una mayor potencia antiviral.