Resumen
Introducción y objetivos: Enterolobium contortisiliquum constituye un recurso forestal nativo sudamericano. En el presente trabajo se estimó la variabilidad del acervo génico y se evaluaron variables germinativas en poblaciones del Noreste argentino de esta especie para analizar la relación entre el flujo génico, el sistema de fecundación y la dispersión. M&M: Se genotipificaron individuos de las poblaciones Eldorado e Ituzaingó y semillas de Ituzaingó mediante cinco y cuatro loci microsatélites nucleares, respectivamente. Se determinaron variables germinativas, se caracterizó la diversidad genética y la estructura genética poblacional, se estimaron los niveles de flujo génico de manera indirecta, se identificó la presencia de alelos heredados vía polen y se determinó la representatividad de la variabilidad genética nuclear a nivel de locus y de acervo génico. Resultados: Las poblaciones analizadas presentaron elevada diversidad genética. Se detectó el aporte, como mínimo, de uno o dos árboles donantes de polen por fruto y ausencia de estructura genética poblacional como consecuencia de elevados niveles de flujo génico mediado por polen y semillas. Las semillas presentaron la mayor diferenciación respecto a su complemento tanto a nivel de locus como de acervo génico. Conclusiones: Los elevados niveles de flujo génico detectados contribuyen al mantenimiento de la variabilidad del acervo génico mientras que, la detección de elevados niveles de diversidad genética, valores nulos del coeficiente de endogamia, ausencia de estructura genética y alelos heredados vía polen a partir de una fuente externa a las poblaciones estudiadas, respaldan que la alogamia es el sistema de fecundación dominante en ellas.
Métodos
Los individuos adultos de ambas poblaciones fueron genotipificados empleando cinco loci microsatélites nucleares (SSRnu) específicos de Enterolobium cyclocarpum (Jacq.) Griseb.: Ency-4, Ency-8, Ency-17, Ency-24, Ency-33 (Peters et al., 2008), transferidos a E. contortisiliquum por Moreira et al. (2012), mientras que el tejido embrionario fue genotipificado empleando cuatro de estos SSRnu (Ency-4, Ency-8, Ency-24 y Ency-33), debido a la elevada proporción de datos perdidos en el locus Ency- 17. Las reacciones de amplificación se realizaron en un volumen final de 14μl empleando 0,5ng/μl de ADN genómico; 1X de buffer KCl; entre 1,12-1,40mM de MgCl2 en función del locus analizado; 1,25mM de cada dNTP; 1U de Taq polimerasa; entre 0,33-0,60μM del cebador reverse, entre 0,20-0,40μM del cebador forward en función del locus analizado y 0,2 μM del cebador universal M13 marcado con un fluoróforo (FAM o HEX) en su extremo 5´. La genotipificación de los individuos y del tejido embrionario se realizó mediante el método de los tres cebadores propuesto por Schuelke (2000) modificado por Goncalves et al. (2013). La genotipificación de los amplicones se llevó a cabo por medio de electroforesis capilar en un secuenciador automático ABI 3730 XL (Macrogen, Inc., Corea del Sur) empleando el marcador de peso estándar GS500- ROXTM (Applied Biosystems®). Los diferentes alelos fueron identificados y codificados a partir del tamaño de los fragmentos usando el programa Peak Scanner 1.0 (Applied Biosystems®). La amplificación se realizó en dos etapas: 35 ciclos empleando la temperatura de hibridación (TA) específica de los cebadores SSRnu y ocho ciclos empleando la TA del cebador universal M13. Las reacciones de amplificación fueron realizadas en un termociclador con gradiente de temperatura (Biometra TProfessional Standard) a temperatura de hibridación fija de 54°C para los loci Ency-24 y Ency-33, de 56°C para los loci Ency-4 y Ency-17 y de 58°C para el locus Ency-8.