Caracterización bioquímica y molecular de un cultivo mixto de actinobacterias

Abstract

Los antibióticos(ATBs),al entrar en contacto con una población bacteriana, sólo permiten la proliferación de bacterias que presenten mecanismos de resistencia. Por otro lado, RAPD-PCR detecta polimorfismos genéticos (PG), por lo que resulta útil en la diferenciación de bacterias pertenecientes a un mismo género. El estudio de la resistencia a ATBs y RAPD-PCR permite obtener perfiles diferenciales entre microorganismos.Objetivos:Obtener los perfiles de ATB y PG de cuatro actinobacterias y comprobar su sobrevida al finalizar un ensayo de biorremediación. Materiales y métodos: Actinobacterias: Streptomyces M7, MC1, A5 yA. tucumanensis AB0. Sensibilidad a ATB: En cajas de Petri con MH se cultivaron las cepas en césped. Luego se colocaron discos de ATB sobre la superficie, se incubaron a 37 ºC durante 7 días y se midieron los diámetros de los halos de inhibición. Detección de PG: Para RAPD-PCR se utilizaron los cebadores: DA F 5?-GAG GTC GTG CTG ACC GTG CTG CA-3? y DA R 5?-GTT GAT GTG CTG GCC GTC GAC GT-3?. Se ensayaron temperaturas de hibridación entre 50 y 60 ºC, para obtener un perfil único. Los productos se visualizaron en geles de poliacrilamida al 6% teñidos con AgNO3. Resultados:Sensibilidad a ATB: MC1 presentó resistencia a 15 µg mL-1 de minociclina, A5 a 10 µg mL-1 de imipenem, AB0 a 25 µg mL-1 de gentamicina y M7 a 20 µg mL-1 de eritromicina + 70 µg mL-1 de lincomicina. Detección de PG: a 55 °C se obtuvieron perfiles característicos para cada cepa.Conclusión: Los perfiles de ATB y PG de las cepas puras coincidieron con los de las cepas reaisladas del ensayo de biorremediación.Los perfiles característicos permiten confirmar la identidad, y por lo tanto la sobrevida, de las cepas del cultivo mixto al final del proceso de biorremediación.