Evaluación de la calidad microbiológica, inocuidad, actividad inmunoestimulante y antiviral de escleroglucano producido por Sclerotium rolfsii

Abstract

El escleroglucano es un β-glucano de elevado peso molecular, producido por hongos del género Sclerotium. Numerosos trabajos afirman que posee múltiples propiedades medicinales, proponiendo su uso en alimentos funcionales, nutracéuticos y vacunas. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la calidad, inocuidad, y efectos inmunoestimulante y antiviral de biopolímero escleroglucano, producido en nuestro laboratorio por cultivo sumergido con Sclerotium rolfsii ATCC 201126. Se determinó: grado de pureza (% de carbohidratos totales, reductores y proteínas), contenido de levaduras, mohos y bacterias, concentración de endotoxina (test LAL) y efecto citotóxico sobre células Hep-2, RAW 264.7 y Vero (test MTT). Se visualizó la internalización del polímero (derivatizado con FITC) en células RAW 264.7 mediante microscopía de fluorescencia. Se investigó el efecto de escleroglucano sobre actividad fagocítica y microbicida de polimorfonucleares (PMN) y células RAW 264.7 que se incubaron con polímero y posteriormente con Saccharomyces cerevisiae, determinándose % de fagocitosis, índice fagocítico y % de lisis de las levaduras fagocitadas. Finalmente se determinó el % de inhibición de la replicación de los virus herpes simplex (HSV) y de la estomatitis vesicular (VSV) en células Vero incubadas con el polímero a diferentes tiempos post-infección. El polímero presentó excelentes cualidades químicas y microbiológicas (>95% de carbohidratos totales, no se aislaron hongos ni bacterias). Los niveles de endotoxina fueron bajos (0.73±0.03 UE/mL para una solución de EPS de 100 µg/mL y 1.36±0.21 UE/ml para una solución de 200 µg/mL). A concentraciones entre 25-200 µg/mL resultó inocuo sobre las líneas celulares ensayadas. Se visualizó escleroglucano fluorescente en el interior de las células observándose con una distribución citoplasmática homogénea a los 30 minutos y una localización adyacente al núcleo luego de 1 y 3 horas de incubación. El tratamiento con EPS (50 y 100 µg/mL) aumentó la actividad fagocítica en células RAW 264.7 comparadas con el control no tratado (13% y 9% vs. 2%), mientras que no estimuló a los PMN. EPS inhibió la replicación de HSV en un 93% pero no tuvo efecto contra VSV. Las cualidades evaluadas comprenden estudios preliminares y resultan de altísimo valor, puesto que orientan hacia la búsqueda de posibles aplicaciones biotecnológicas, ya sea como aditivo alimentario, nutracéutico, adyuvante para vacunas, etc.