Biosíntesis de tirosinasas y l-dopa a partir de aislamientos fúngicos nativos de la reserva la florida (Tucumán, Argentina)

Abstract

En este trabajo se evaluó la capacidad de hongos fi lamentosos aislados de la reserva La Florida (Tucumán-Argentina) para la síntesis de tirosinasa (TYR) y L-Dopa. Se realizó un screening preliminar para seleccionar organismos hiperproductores de TYRs, mediante un método cualitativo de revelado en placas utilizando sustratos específi cos. De 80 hongos evaluados 4 resultaron positivos para los 4 sustratos ensayados: LF 1.18, LF 1.30, LF 1.47 y LF 2.11. Estos fueron luego evaluados en dos medios de producción: Czapek-Dox Agar (CDA), para determinar la producción TYRs basales y Czapek-Dox Agar Enriquecido (ECA, ídem a CDA suplementado con CuSO4·5H2O 0,004% p/v y L-tirosina 2% p/v). Para cada condición de cultivo se obtuvieron dos extractos crudos: un lisado celular resultante de la homogeneización con ?BeadBeater? y un exudado resultante de dos etapas de congelamiento-descongelamiento. Con ambos se llevó a cabo la determinación cuantitativa de actividades mono- y difenolasa de la enzima TYR, mediante el método del Dopacromo. Posteriormente los hongos fueron comparados según su capacidad para sintetizar L-Dopa en cultivo sumergido. El aislamiento LF 1.30 fue el más promisorio, teniendo en cuenta los títulos de L-Dopa (38,54 mg/L) y los valores de actividad TYR mono- y difenolasa (5,71 UE/L y 6,18 UE/L, respectivamente) a las 48 h de cultivo.