Influencia del medio de cultivo sobre una actividad proteasa producida por Bacillus thuringiensis rt

Abstract

Bacillusthuringiensis (Bt) es una bacteria que posee como característica diagnóstica elproducir proteínas cristales insecticidas denominadas delta endotoxinas, y porlo cual se la utiliza para el control diversas plagas agrícolas. Además, produce otrosfactores de virulencia, entre ellos fosfolipasas, quitinasas, proteasas,etc. quepermiten a la bacteria sobrevivir y multiplicarse dentro del huésped, evadir susistema inmune y producir septicemia. Estas enzimas pueden actuar de formasinérgica o por el contrario disminuir la actividad entomopatógena. El objetivo de este trabajo es evaluar diferentes mediosde cultivo para obtener una alta actividadproteolítica que nos permita en futuros estudios purificarla y caracterizarla. En este estudio, se utilizó un aislamiento nativo Bt RT (Genebank: EF638795 16S partial sequence) y se probaron cuatromedios de cultivo: M1 (Luria Bertani) (LB), M2 (LB suplementado con suerolácteo), M3 (LB suplementado con caseína) y M4 (extracto de levadura, caseína,K2HPO4, KH2PO4). Los cultivos seincubaron a 30°C, 200 rpm, durante 72 h, se centrifugaron y las determinacionesse realizaron utilizando el sobrenadante. La actividad proteasa se determinósegún Secades y Guijarro (1999) y la concentración de proteínas totales segúnLowry (1963). El medio M2 presentó la mayor actividad (159,37 ± 9,17 U/mg),presentando diferencias significativas con los otros medios (p≥0,05). M1 (10,55± 1,7 U/mg), M3 (17,16 ± 2,68 U/mg) y M4 (27,76 ± 1,15 U/mg), no presentarondiferencias significativas entre sí. Dado que el suero fue el sustrato queprodujo la actividad específica más alta, se evaluó la dosis respuesta de esteinductor. Se evaluaron concentraciones de suero en LB en un rango entre 1 a17,5 g/L. La actividad proteasa mostró una correlación positiva a medida queaumentaba la dosis de suero, pero a partir de los 7,5 g/L no hubo diferenciassignificativas entre las mediciones (p≥0,05). Nuestros resultados concuerdancon otros autores, que postulan que la producción de proteasas en Bacillus es influenciada por lacomposición del medio de cultivo y las condiciones de fermentación. La presencia de suero en el medio de cultivoincrementó la producción planteando una potencial utilidad de este desechoindustrial contaminante difícil de tratar.