Detección de PVY y PLRV por RT-qPCR en tubérculos de papa, como estudio de una alternativa de diagnóstico en la certificación de papa semilla

Abstract

El cultivo de papa es afectado por virus que disminuyen rendimiento o calidad de tubérculospara simiente o uso industrial. Por eso, INASE incluye los virus PVY, PVX, PLRV y PVS en lafiscalización de tubérculos simiente. Como inicio de un proyecto que incluye los cuatro virus, seevaluaron los primers PVY182 (Agindotan et al., 2007), PLRV336 (Bostan y Peker, 2009) yPLRV390 (Peiman y Xie, 2006) para detectar PVY y PLRV. De plantas de 40 días obtenidasdesde papas infectadas con PVY o PLRV (y desde papas sanas) se extrajo ARN con protocoloTrizol®, se realizó retrotranscripción con enzima MMLV de Invitrogen® y amplificación por RTqPCR con intercalante Evagreen de un control interno de ARN vegetal. Se realizaron ademásgradientes de temperatura para optimizar el uso de los primers. En la detección de PVY se logróamplificar el producto de peso molecular esperado (182 pb) y se confirmó su identidad porsecuenciación Sanger y análisis bioinformático (BLAST). No se obtuvieron aún los productos deamplificación esperados con PLRV336 y 390 con el material infectado con PLRV analizadohasta el momento, por lo que se repetirán pruebas con nuevos tubérculos. Se ha planificadoademás utilizar los mismos modelos experimentales para evaluar primers para PVX y PVS.Estos primeros estudios, con resultados promisorios para PVY, validarán una tecnología de altasensibilidad y especificidad adoptable a futuro para certificar tubérculos simiente de papa.