Comparación de métodos de lavado y tiempos de conservación de los frotis para evaluar el acrosoma en espermatozoides de llama mediante la tinción de Coomassie Blue

Abstract

El objetivo de este trabajo fue comparar métodos de lavado y conservación de frotis para evaluar el acrosoma en espermatozoides de llama mediante la tinción con Coomassie Blue (CB), con el propósito de facilitar la técnica e independizar los momentos de la extracción de semen de la evaluación de los acrosomas espermáticos. Se procesaron 12 eyaculados, se probaron dos tipos de lavado de los frotis fijados (con PBS o solución fisiológica, SF) y se evaluaron diferentes temperaturas (5º C y temperatura ambiente) y tiempos (0, 1 y 7 días) de conservación. Se evaluaron los siguientes frotis (cada uno lavado con PBS o con SF): 1) fijados, teñidos y evaluados el mismo día de la extracción; 2) fijados, teñidos y conservados 24 hs a temperatura ambiente y luego evaluados; 3) fijados, conservados a 4º C durante 1 día y luego teñidos y evaluados; 4) fijados, conservados a 4º C durante 7 días y luego teñidos y evaluados. Se evaluaron un total de 8 frotis por eyaculado. No se observaron diferencias significativas en el porcentaje de acrosomas presentes evaluado por CB entre las dos metodologías de lavado de los frotis fijados, ni entre las diferentes temperaturas y los diferentes tiempos de conservación de los frotis. Conclusión: es posible utilizar solución fisiológica para lavar los frotis fijados facilitando la técnica de CB para evaluar la presencia de los acrosomas en espermatozoides de llama. Además, se logró independizar los momentos de la extracción de semen de la evaluación de los acrosomas espermáticos.

The objective of this study was to compare washing methods and smear conservation periods for llama sperm acrosome assessment using the Coomassie Blue stain, with the aim of facilitating the technique and to allow the moment of sperm acrosome evaluation become independent of the moment of semen collection. Twelve ejaculates were processed; two types of washing of the smears (with PBS or with physiologic solution, PS) and different temperatures (5 ºC and room temperature) and periods of conservation (0, 1 and 7 days) were assessed. The following smears were evaluated: 1) fixed, stained and evaluated the same day of collection; 2) fixed, stained and conserved for 24 hours at room temperature and then evaluated; 3) fixed, conserved at 4º C for 1 day and then stained and evaluated and 4) fixed, conserved at 4º C for 7 days and then stained and evaluated. A total of 8 smears per ejaculate were evaluated. No significant differences were observed in the percentages of acrosomes present, evaluated by CB, between both types of washing of the fixed smears, nor between the different temperatures and conservation periods of the fixed smears. Conclusions: it is possible to use physiologic solution to wash the fixed smears, thus facilitating the Coomassie Blue technique used to evaluate the presence of llama sperm acrosomes. In addition, it was possible to separate the moment of sperm acrosome evaluation from the semen collection.