Producción de IL-4 bovina a partir de un BHV-1 recombinante y prueba de bioactividad en ensayos de proliferación linfocitaria

Abstract

En las infecciones virales, la adecuada presentación de péptidos antigénicos y la activación de los LT CD4+ por parte de las células presentadoras de antígeno (CPA), principalmente células dendríticas (CD), se corresponde con una respuesta inmunitaria más eficiente y de memoria inmunológica prolongada, con efecto sobre la evolución de la infección. Para el estudio de la respuesta inmunitaria celular frente a antígenos en bovinos, nos propusimos derivar in vitro CD a partir de monocitos, para lo cual es esencial el uso de IL-4. El objetivo de este trabajo fue producir IL-4 en nuestro laboratorio, a partir de un virus BHV-1 recombinante que tiene un plásmido que expresa la IL-4 bovina como gen temprano (BHV-1/eIL-4), gentilmente cedido por el Dr. G.M. Keil (Alemania). Se adaptó el crecimiento del BHV-1/eIL-4 a células MDBK de nuestro laboratorio; se obtuvieron y titularon distintos stocks virales de hasta 5 MOI. Para bloquear la expresión de genes tardíos del BHV-1, se trataron las células MDBK con distintas dosis de ácido fosfonoacético (PAA, Sigma). La ausencia de BHV-1 infectivo en sobrenadante de células infectadas con el BHV-1/eIL-4 se confirmó en ensayos de infección y monitoreo de efecto citopático de lisis en MDBK. La bioactividad de la IL-4 excretada en el sobrenadante de las MDBK infectadas con el BHV-1/eIL-4 se confirmó en ensayos de proliferación de PBMC bovinas, medida por metabolismo del MTT.