Expresión de TNF-α y TNF-RII en bovinos infectados con el virus de leucosis bovina que desarrollan alta y baja carga proviral

Abstract

Introducción: El virus de la leucosis bovina (BLV) es un retrovirus causante de una enfermedad linfoproliferativa que afecta al ganado bovino. El desarrollo de los perfiles de infección de alta carga proviral (ACPV) o de baja carga proviral (BCPV) estaría relacionado a factores genéticos e inmunológicos. El TNF-α tiene un importante rol en la respuesta inmune; sus acciones están relacionadas a la expresión de sus receptores TNFRI y RII: induciendo la apoptosis o estimulando la proliferación celular, respectivamente, aunque no de manera excluyente. En la infección por BLV, postulamos que los animales con ACPV son menos eficientes para eliminar los linfocitos infectados que los animales de BCPV; este fenómeno estaría regulado en parte por el mecanismo apoptótico y por un desbalance en la expresión de los receptores para TNF-α.Objetivo: Cuantificar la expresión de ARNm de TNF-α y TNFRII en animales de ACPV, BCPV o negativos para BLV. Metodología: Se extrajeron muestras de sangre entera de animales negativos y positivos para BLV. Se determinó el estatus infeccioso por ELISA y la carga proviral por PCR en tiempo real. Se seleccionaron 11 animales de ACPV, 8 de BCPV y 3 negativos. Se les extrajo 60 ml de sangre y se obtuvo el buffy coat mediante la lisis de los glóbulos rojos con cloruro de amonio. Por otro lado, se seleccionaron 3 animales de ACPV y 3 animales de BCPV, se les extrajo 60 ml de sangre y se obtuvieron los PBMC mediante gradiente de Ficoll. Estas células fueron cultivadas por 24 hs en presencia de rTNF-α. La expresión de ARNm para TNF-α y TNFRII se analizó mediante la metodología de cuantificación relativa por PCR en tiempo real, utilizando SybrGreen y amplificando GAPDH como gen endógeno. Los resultados de expresión fueron analizados con REST© (Relative Expression Software Tool) 2009.Resultados: Se evidenció una mayor expresión de ARNm de TNF-α y de TNFRII en los PBMC de los animales positivos para BLV con respecto a los negativos. No se encontraron diferencias significativas en la expresión de dichos genes entre los animales positivos con diferentes perfiles de infección. Se observó una mayor expresión de TNFRII en los PBMC de animales de BCPV estimulados con rTNF-α con respecto a los animales de ACPV. Esta diferencia no se observó para el gen de TNF-α.Conclusiones: En animales con perfiles de infección por BLV ya establecidos, la expresión de TNF-α y TNFRII fue similar. Restaría analizar el balance de expresión de ambos receptores para TNF-α, RI y RII, y su relación con la apoptosis o proliferación celular.