Mostrar el registro sencillo del ítem
dc.contributor.author
Ambrosis, Nicolás Martín
![Se ha confirmado la validez de este valor de autoridad por un usuario](/themes/CONICETDigital/images/authority_control/invisible.gif)
dc.contributor.author
Fernandez, Julieta
![Se ha confirmado la validez de este valor de autoridad por un usuario](/themes/CONICETDigital/images/authority_control/invisible.gif)
dc.contributor.author
Sisti, Federico Bernardo
![Se ha confirmado la validez de este valor de autoridad por un usuario](/themes/CONICETDigital/images/authority_control/invisible.gif)
dc.date.available
2022-12-12T12:51:37Z
dc.date.issued
2020-11
dc.identifier.citation
Ambrosis, Nicolás Martín; Fernandez, Julieta; Sisti, Federico Bernardo; Counter-Selection Method for Markerless Allelic Exchange in Bordetella bronchiseptica Based on sacB Gene From Bacillus subtilis; Blackwell Publishing; Current Protocols in Microbiology; 59; 1; 11-2020; 1-17
dc.identifier.issn
1934-8525
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/180706
dc.description.abstract
Bordetella bronchiseptica is a gram-negative bacterium that causes respiratory tract infections. It is a natural pathogen of a wide variety of mammals, including some used as laboratory models. This makes B. bronchiseptica an ideal organism to study pathogen–host interactions in order to unveil molecular mechanisms behind pathogenic processes. Even though genetic engineering is an essential tool in this area, there are just a few reports about genome manipulation techniques in this organism. In this article we describe an allelic exchange protocol based on double crossover recombination facilitated by the Bacillus subtilis sacB gene that can be applied for partial or complete gene knockouts, single-nucleotide mutations, or even introduction of coding sequences for transcriptional fusions. In contrast to previously employed techniques, this protocol renders genetically manipulated chromosomes without foreign DNA and enables the construction of successive genome manipulation using the same vector backbone. The entire procedure has been developed for fast and reliable manipulations with a total duration of 2 weeks. © 2020 Wiley Periodicals LLC. Basic Protocol 1: Setting up strains. Basic Protocol 2: Homologous recombination (first crossing-over). Alternate Protocol: B. bronchiseptica electroporation. Basic Protocol 3: Screening for sucrose-sensitive clones. Basic Protocol 4: Homologous recombination (second crossing-over). Basic Protocol 5: PCR screening of putative marker-exchange mutants. Support Protocol: Electrocompetent cell preparation.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
eng
dc.publisher
Blackwell Publishing
![Se ha confirmado la validez de este valor de autoridad por un usuario](/themes/CONICETDigital/images/authority_control/invisible.gif)
dc.rights
info:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject
ALLELIC EXCHANGE
dc.subject
BORDETELLA BRONCHISEPTICA
dc.subject
GENETIC ENGINEERING
dc.subject
MARKERLESS DELETIONS
dc.subject
SUCROSE COUNTER-SELECTION
dc.subject.classification
Bioquímica y Biología Molecular
![Se ha confirmado la validez de este valor de autoridad por un usuario](/themes/CONICETDigital/images/authority_control/invisible.gif)
dc.subject.classification
Ciencias Biológicas
![Se ha confirmado la validez de este valor de autoridad por un usuario](/themes/CONICETDigital/images/authority_control/invisible.gif)
dc.subject.classification
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
![Se ha confirmado la validez de este valor de autoridad por un usuario](/themes/CONICETDigital/images/authority_control/invisible.gif)
dc.title
Counter-Selection Method for Markerless Allelic Exchange in Bordetella bronchiseptica Based on sacB Gene From Bacillus subtilis
dc.type
info:eu-repo/semantics/article
dc.type
info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated
2021-09-06T17:46:14Z
dc.identifier.eissn
1934-8533
dc.journal.volume
59
dc.journal.number
1
dc.journal.pagination
1-17
dc.journal.pais
Estados Unidos
![Se ha confirmado la validez de este valor de autoridad por un usuario](/themes/CONICETDigital/images/authority_control/invisible.gif)
dc.description.fil
Fil: Ambrosis, Nicolás Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; Argentina
dc.description.fil
Fil: Fernandez, Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; Argentina
dc.description.fil
Fil: Sisti, Federico Bernardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; Argentina
dc.journal.title
Current Protocols in Microbiology
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/cpmc.125
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/http://dx.doi.org/10.1002/cpmc.125
Archivos asociados