Efecto de inductores enzimáticos en la decoloración de negro reactivo 5 por levaduras del orden trichosporonales

Abstract

Introducción y Objetivos: Haglerozima chiarellii ATCC MYA-4694, Cutaneotrichosporon curvatum ATCC 10567 y Trichosporon akiyoshidainum HP-2023 son levaduras del orden Trichosporonales. T. akiyoshidainum producen enzimas como Fenol Oxidasas (FOX), Lacasas (Lac), Manganeso Peroxidasas (MnP), Peroxidasas Independiente de Manganeso (PIM) en cultivos con Negro Reactivo 5 (NR5). Estas enzimas, por su baja especificidad, podrían estar involucradas en la modificación de lignina y la degradación de compuestos xenobióticos, como los colorantes textiles. Por ello, el objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de diversos inductores sobre la decoloración de NR5, por H. chiarellii y C. curvatum y compararlos con los resultados obtenidos en cultivos de T. akiyoshidainum. Materiales y Métodos: Para confirmar el poder decolorante de H. chiarellii y C. curvatum, se realizaron cultivos de 50 mL en medio NDM (Normal Decolourization Medium) líquido, con 200 mg/L del colorante e incubados a 25°C y 250 rpm por 24 horas. Se tomaron muestras cada 3 horas de cultivos y se evaluaron las actividades enzimáticas y la cinética de decoloración de NR5. A continuación se prepararon cultivos de 5 mL en medio NDM, con 200 mg/L del colorante NR5 y uno de los siguientes inductores: Fe2+, Cu2+, Mn2+, ácido 2,2´azinobis-(3-etilbenzotiazolina)-6-sulfónico (ABTS), alcohol veratrílico, vainillin, ácido cafeico y lignina en una de dos concentraciones. Los cultivos fueron inoculados con las diferentes levaduras e incubados a 25 °C y 250 rpm durante 6 horas. Posteriormente, se evaluó la actividad Lac, FOX, MnP y PIM en los sobrenadantes de cultivo, y el porcentaje de decoloración para cada cultivo. Resultados: A las 24 h de cultivo, ambas levaduras produjeron una decoloración superior al 80% en ambos casos. Las actividades enzimáticas medidas fueron comparables a las obtenidas en cultivos de T. akiyoshidainum (< 0.5 UI/L), con picos de actividad entre las 6 y las 12 horas, medidos sólo en cultivos con el colorante. Ninguna de las actividades enzimáticas en cultivos de H. chiarellii y C. curvatum aumentó a causa de los inductores ensayados, en ninguna de las concentraciones probadas tras 6 horas de cultivo. Los cultivos de ambas levaduras a las 6 h mostraron una decoloración promedio inferior al 10%, y no se registraron mayores valores de decoloración atribuibles a los inductores evaluados. Conclusiones: Se comprobó que H. chiarellii y C. curvatum decoloran eficientemente NR5 en cultivos líquidos. Además, se demostró que el colorante puede inducir actividades Lac, FOX, MnP y PIM en estas levaduras, pero que el agregado de inductores de enzimas ligninolíticas no tiene efecto sobre las actividades medidas ni sobre la velocidad de decoloración, sugiriendo la participación de otras enzimas o de mecanismos inespecíficos de decoloración en levaduras del orden Trichosporonales.