Comparison between real-time PCR, serology and culture in leptospirosis, from samples of wild animals trapped in Buenos Aires Province, Argentina

Abstract

The definitive diagnostic test for leptospirosis is the recovery of leptospires from the culture of clinical samples. The micro- agglutination test (MAT) which has high sensitivity and specificity, is a reference standard test for serum diagnostic. The advent of molecular methods has facilitated the diagnosis of leptospirosis by PCR reaction. The aim of this study was to compare the results obtained by using bacteriology (culture), serology and molecular biology, from samples of wild animals. The 8.8% of positive samples was obtained by MAT (two R. norvegicus and L. griseus positives). Kidneys from all animals were cultured, and two isolate (2/34) of L. interrogans from R. norvegicus was obtained (6.9%). Serum sample was studied by real-time PCR and 17/34 was positive (50%). Isolation of leptospires from clinical samples is strong evidence to confirm the diagnosis in order to identify the serotypes circulating in a particular geographic region, and in turn be used as antigens in MAT. In real-time PCR from serum samples time, proved to have high sensitivity, being an important tool for the diagnosis of leptospirosis, especially in acute cases of disease, in which the other techniques often provide negative results.

La recuperación de leptospiras a partir del cultivo de muestras clínicas es el diagnóstico definitivo de la enfermedad. La prueba de micro aglutinación (MAT) que tiene una alta sensibilidad y especificidad, es la prueba de referencia. La llegada de los métodos moleculares ha facilitado el diagnóstico de la leptospirosis mediante técnicas de PCR. El objetivo del presente trabajo fue comparar los resultados de bacteriología (cultivo), serología y biología molecular, a partir de muestras de animales salvajes. Por medio MAT se detectó un 8.8% de positividad (dos R. norvegicus y un L. griseus). Se aislaron leptospiras en 2/34 cultivos de riñón (6.9%). Mediante PCR en tiempo real se detecta 17/34 animales positivos (50%). El aislamiento de leptospiras a partir de muestras clínicas es la evidencia para confirmar el diagnóstico, permitiendo identificar los serotipos que circulan en una región geográfica determinada, y a su vez ser utilizados como antígenos en MAT. La PCR en tiempo real a partir de muestras de suero, demostró tener una alta sensibilidad, siendo una herramienta importante para el diagnóstico de la leptospirosis en casos agudos de enfermedad, donde las otras técnicas a menudo proporcionan resultados negativos.