Glicosaminoglicanos aislados de fluidos del tracto genital femenino aumentan la eficiencia de la fertilización in vitro en cerdos

Abstract

Después del apareamiento natural, miles de millones de espermatozoides se transportan en el tracto genital femenino donde quedan expuestos a fluidos biológicos como el líquido uterino, el líquido oviductal y el líquido folicular. La mayoría de estos fluidos están compuestos de moléculas complejas que incluyen grandes cantidades de glicosaminoglicanos (GAGs). Los GAGs son una familia de polisacáridos lineales que contienen disacáridos de hexosamina repetitivos. Según su estructura, se han descripto dos clases principales de GAGs: los GAGs sulfatados, incluidos el sulfato de heparán (HS), el sulfato de condroitina (CS), el sulfato de queratán (KS) y el GAG no sulfatado ácido hialurónico (HA). Diferentes estudios mostraron que los GAGs pueden estar involucrados en la capacitación y la reacción acrosomal “in vivo” y su presencia en el reservorio espermático podría mantener la estabilidad de la membrana del espermatozoide. Dado que el ácido hialurónico parece mediar en el proceso de fertilización, en este estudio nos propusimos aislar los GAGs de fluidos del tracto femenino de cerdas y evaluar su efecto en la fertilización in vitro (FIV). Se aislaron GAGs de fluido folicular (G-FF), fluido oviductal (G-OF) y secreción de células del cumulus (G-COS). Los GAG se aislaron mediante digestión con proteasa, seguido de extracción de lípidos y etapas secuenciadas de precipitaciones. La composición de GAGs se determinó como se describió previamente por Volpi N et.al. (J Matern Fetal Neonatal Med. 22: 1-61. 2018). La FIV se realizó en medio TALP conteniendo 120 μg / ml de G-COS, 120 μg / ml de G-FOP, 120 μg / ml de G-FF, 100 o 500 μg / ml de HA. Cada grupo se co-cultivó con 5x105 espermatozoides/ml y se determinaron los parámetros de fertilización. Se observó que G-FF mostró la menor tasa de unión a la zona pelúcida, mientras que mostró la tasa de penetración de espermatozoides más alta (%) y la mayor eficiencia para formar pronúcleos (P <0.05, ANOVA seguido de Tukey post hoc). No se observó ningún efecto después de la incubación con HA o G-COS. Este estudio preliminar sugiere que los GAG aislados del FF pueden mejorar los resultados de la FIV en porcinos.