Evaluación de la técnica de rosa de bengala modificada en el diagnóstico de brucelosis porcina

Abstract

La brucelosis porcina es una enfermedad infecto-contagiosa, zoonótica y de curso crónico ocasionada por Brucella suis. Se caracteriza por provocar aborto, infertilidad y patologías osteoarticulares, además de innumerables pérdidas económicas en la industria porcina. El diagnóstico serológico se realiza mediante la misma metodología implementada en bovinos, se realiza una prueba tamiz (Antígeno Bufferado en Placa (BPA) o Rosa de Bengala (RB)), siendo los positivos analizados mediante la prueba confirmatoria de Polarización de la Fluorescencia (FPA). El diagnóstico generalmente se establece a nivel de la piara, ya que estas pruebas son sensibles y aplicables a un gran número de muestras, poseen baja especificidad, pero no están debidamente estandarizadas para la especie porcina. El objetivo de este trabajo fue evaluar modificaciones en las relaciones de antígeno RB y suero porcino, así como en los tiempos de lectura, respecto de la técnica oficial. MATERIALES Y MÉTODOS: Se analizaron 173 muestras de porcinos de diferentes categorías. Se obtuvo sangre mediante punción yugular y se obtuvo el suero. La detección de anticuerpos específicos se realizó mediante las pruebas de BPA, RB convencional (RBC), RB modificada (RBM) y FPA. Se emplearon dos sueros controles positivos y dos sueros controles negativos en cada prueba. En todos los casos se utilizaron antígenos cedidos por BIOTANDIL (Laboratorio Biológico de Tandil SRL). Las determinaciones de FPA se realizaron con un polarímetro Sentry 100. Las pruebas RBC, BPA y FPA se realizaron e interpretaron de acuerdo a la normativa oficial (Nicola, 2009). La prueba RBM se realizó empleando 75 µl de suero y 25 µl de antígeno con lectura a los 4, 6 y 8 minutos. Se estimó la Sensibilidad (S), Especificidad (E) y Valores Predictivos (VP) de RBC y RBM, considerando como verdaderos positivos aquellos sueros que expresaban valores positivos a BPA y FPA en conjunto, así como verdaderos negativos a los que fueron negativos a ambas pruebas. Para determinar la concordancia entre las pruebas se evaluó el índice Kappa con un 95% de confianza (IC95%) y se calificó del siguiente modo:- excelente: índice Kappa mayor que 0,75.- buena: índice Kappa entre 0,40 y 0,75.- pobre: índice Kappa menor que 0,40.RESULTADOS:Dado que la lectura con la técnica de RBM resultó ser más efectiva a los 8 minutos, para el análisis se utilizaron los resultados obtenidos con ese tiempo de lectura. El porcentaje (proporción) de sueros positivos detectados por cada una de las pruebas serológicas fue: 17,91% (31/173) para RBC; 38,73% (67/173) para RBM; 42,77% (74/173) para BPA y 60,69% (105/173) para FPA. La aglutinación siempre se hizo más visible a medida que el tiempo de lectura transcurría. Los controles nunca se modificaron con el correr del tiempo. La concordancia general entre las pruebas serológicas analizadas fue excelente para RBM-BPA y RBM-BPA+FPA; buena para RBM-FPA y pobre para RBC-BPA, RBC-FPA y RBC-BPA+FPA (Tabla 1).En la Tabla 2 se expresan los valores de S, E, VP positivo, VP negativo y exactitud para las pruebas RBC y RBM. La modificación en la técnica de RB (RBM) mejoró sensiblemente la especificidad y notablemente la sensibilidad respecto de RBC. DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN:Las modificaciones realizadas en la prueba de RBC, mejoraron notablemente los resultados obtenidos para el diagnóstico de la brucelosis porcina. La mayor cantidad de animales detectados por FPA fue debida posiblemente a una mayor sensibilidad analítica de esta prueba, que permite identificar animales en el inicio de la infección, cuando los títulos de anticuerpos son aún bajos.SENASA y la OIE recomiendan el RB como prueba tamiz, en su versión estandarizada para bovinos (RBc); sin embargo esta técnica presentó muy baja sensibilidad diagnóstica respecto a las otras pruebas analizadas. Nuestros resultados coinciden con lo observado en la especie caprina y ovina, en la que el aumento en la relación suero/antígeno, mejora notablemente la sensibilidad de la prueba de RB. Estos resultados indican que, tal lo observado para la brucelosis caprina, las recomendaciones oficiales en relación a la prueba de RB no serían adecuadas para el diagnóstico de la brucelosis porcina.