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Generation of myostatin edited horse embryos using CRISPR/Cas9 technology and somatic cell nuclear transfer

Moro, Lucía NataliaIcon ; Viale, Diego LuisIcon ; Bastón, Juan Ignacio; Arnold, Victoria; Suvá, MarianaIcon ; Wiedenmann, Elisabet; Olguín, Martín; Miriuka, Santiago GabrielIcon ; Vichera, Gabriel DamianIcon
Fecha de publicación: 09/2020
Editorial: Nature
Revista: Scientific Reports
ISSN: 2045-2322
Idioma: Inglés
Tipo de recurso: Artículo publicado
Clasificación temática:
Bioquímica y Biología Molecular; Tecnología GM, clonación de ganado, selección asistida, diagnósticos, tecnología de producción de biomasa, etc.; Biología Celular, Microbiología

Resumen

The application of new technologies for gene editing in horses may allow the generation of improved sportive individuals.Here, we aimed to knock out the myostatin gene (MSTN), a negative regulator of muscle mass development, using CRISPR/Cas9 and to generate edited embryos for the first time in horses. We nucleofected horse fetal fibroblasts with 1, 2 or 5 µg of 2 different gRNA/Cas9 plasmids targeting the first exon of MSTN. We observed that increasing plasmid concentrations improved mutation efficiency. The average efficiency was 63.6% for gRNA1 (14/22 edited clonal cell lines) and 96.2% for gRNA2 (25/26 edited clonal cell lines). Three clonal cell lines were chosen for embryo generation by somatic cell nuclear transfer: one with a monoallelic edition, one with biallelic heterozygous editions and one with a biallelic homozygous edition, which rendered edited blastocysts in each case. Both MSTN editions and off-targets were analyzed in the embryos. In conclusion, CRISPR/Cas9 proved an efficient method to edit the horse genome in a dose dependent manner with high specificity. Adapting this technology sport advantageous alleles could be generated, and a precision breeding program could be developed.
Palabras clave: CRISPR-Cas9 , Gene Edition , SCNT , Embryos
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Identificadores
URI: http://hdl.handle.net/11336/171450
URL: http://www.nature.com/articles/s41598-020-72040-4
DOI: http://dx.doi.org/10.1038/s41598-020-72040-4
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Citación
Moro, Lucía Natalia; Viale, Diego Luis; Bastón, Juan Ignacio; Arnold, Victoria; Suvá, Mariana; et al.; Generation of myostatin edited horse embryos using CRISPR/Cas9 technology and somatic cell nuclear transfer; Nature; Scientific Reports; 10; 1; 9-2020; 1-15
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