Composición de las comunidades de rizobios asociados a la especie Prosopis ruscifolia

Abstract

Las adaptaciones de las plantas con sus microorganismos asociados hacen factible la reutilización y revegetación de tierras salinas. Entre las especies pioneras del parque chaqueño, las pertenecientes al género Prosopis crecen en una gran variabilidad de ambientes. P. ruscifolia es una leguminosa nativa de la región chaqueña semiárida, leñosa, que se destaca por su elevada tolerancia a la salinidad, al estrés hídrico y por su capacidad de adaptarse a suelos degradados. Las plantas leguminosas tienen la capacidad de formar una asociación simbiótica para la fijación de nitrógeno con bacterias de la familia Rhizobiaceae, denominadas comúnmente rizobios. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar los rizobios que están asociados simbióticamente a Prosopis ruscifolia. El muestreo se realizó en suelos de vinales de la localidad de Basail, provincia de Chaco, debajo del dosel de 5 árboles de la especie. Por cada árbol se tomó una muestra compuesta de 4 submuestas. La recuperación de los rizobios se realizó utilizando P. ruscifolia como planta trampa. Para ello, 10 semillas escarificadas y esterilizadas se sembraron en macetas con cada muestra de suelo, las mismas fueron mantenidas con riego con agua esterilizada. A los 120 días se procedió a descalzar las plantas y se colectaron todos los nódulos. Los mismos fueron esterilizados y sembrados en medio de extracto de levadura-manitol (YEM) para el aislamiento de los rizobios. Se clasificaron y seleccionarán las diferentes colonias considerando las características que presentan los rizobios crecidos en este medio, velocidad de crecimiento, la producción de ácido o base, y características macroscópicas de las colonias (color, consistencia, tamaño y forma). Los aislamientos que cumplieron con las características esperadas fueron purificados, multiplicados y conservados a -70 ºC. La diversidad genómica de estos aislamientos fue evaluada a través de la amplificación de las regiones genómicas repetitivas (ERIC-PCR). Un clón de cada perfil ERIC-PCR fue analizado por amplificación de los genes 16S ARNr y de nodulación nodC. En los casos que la amplificación resultó negativa para el gen nodC se ensayó la amplificación del gen nodD. Se encontraron 84 aislamientos con características morfotípicas de rizobios, 33 de ellos de crecimiento lento y 51 de crecimiento rápido. El análisis de ERIC-PCR agrupó los aislamientos rápidos en 23 perfiles, mientras que los aislamientos lentos se agruparon en 10 perfiles diferentes. Encontramos que todos los grupos de crecimiento lento amplificaron el gen nodC, mientras que de los 23 grupos ERIC de crecimiento rápido, 9 amplificaron el gen nodC y 4 el gen nodD. Concluyendo, se obtuvo una colección de 33 aislamientos diferentes colectadas de nódulos de P. rucifolia los cuales presentaron una alta variabilidad fenotípica y genotípica. Se observaron tanto cepas de crecimiento lento como de crecimiento rápido, con mayor abundancia y diversidad de estas últimas. Asimismo, la potencialidad de estas cepas de nodular plantas leguminosas fue confirmada por la amplificación del gen nodC en el 100% de los aislamientos lentos y en el 56% de los aislamientos rápidos.