Infección de células epiteliales mamarias humanas con el virus de leucosis bovina (blv)

Abstract

Introducción y objetivos: El virus de la leucosis bovina es un retrovirus responsable de la leucosis enzoótica bovina. En los últimos años se ha asociado la presencia de distintos virus al desarrollo de cáncer de mama en humanos. Particularmente, se ha detectado la presencia de fragmentos de genes y proteínas del BLV en tejido y sangre proveniente de pacientes con cáncer de mama. Hasta el momento, no se evaluado si el virus es capaz o no de infectar este tipo de células en humanos. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue infectar una línea celular epitelial mamaria humana (MCF10A) con BLV y evaluar el efecto del virus sobre este tipo celular.Materiales y métodos: Se extrajeron 20 ml de sangre entera con heparina de un bovino con linfosarcoma en el estado de Kansas, USA. Se aislaron los linfocitos de sangre periférica (PBMC) mediante el método de Ficoll-Hypaque. Los mismos fueron co-cultivados durante 24 hs con las células MCF10A. Posteriormente, se realizaron lavados con PBS y con tripsina de las células MCF10A infectadas. Esta nueva línea celular se identificó con el nombre de MCF10A BLV. Para evaluar la infección en esta línea celular, se realizó: PCR convencional para la detección del gen viral pol y del gen endógeno GAPDH humano y bovino; inmunofluorescencia indirecta para la detección de la proteína de la cápside viral p24; y western blot para la detección de la proteína p24 en sobrenadante de cultivo y en el pellet de células.Resultados: A partir de los 3 pasajes posteriores a la infección fue posible detectar la presencia del fragmento del gen viral pol en el ADN genómico de las células MCF10A BLV. Al mismo tiempo, en estas células sólo fue posible amplificar un fragmento del gen GAPDH humano, mientras que no se observó amplificación del gen GAPDH bovino. La inmunofluorescencia mostró una escasa cantidad de células positivas para la proteína viral p24. Sin embargo, no fue posible detectar la presencia de esta proteína en el sobrenadante de cultivo mediante western blot. Tampoco fue posible detectar la presencia de la proteína p24 en el lisado celular, lo cual sugiere que, si bien el virus se encuentra integrado en el genoma de las células MCF10A, no se estaría expresando.Conclusión: Hemos infectado una línea celular mamaria humana con BLV. La presencia de la proteína p24 en el citoplasma de las células y la detección de un fragmento del gen viral pol en el genoma de las células MCF10A BLV confirma que el virus es capaz de ingresar en este tipo celular. Sin embargo, la ausencia de proteínas virales en el sobrenadante de cultivo y en los lisados celulares sugiere que, si bien el virus ingresa a las células y se integra al genoma, no se estaría expresando activamente. Se sabe que las infecciones no productivas de ciertos virus se asocian con el desarrollo de tumores. Sería importante continuar con los estudios en este tema para poder comprender si efectivamente el BLV tiene algún rol en el desarrollo de cáncer de mama en humanos.