Análisis de los genes v-Bcl2 y v-Flip de seis aislamientos locales del Gammaherpesvirus bovino 4 (BoHV-4)

Abstract

Los virus, en su proceso evolutivo, han desarrollado mecanismos específicos para eludir las defensas del hospedador. Algunos virus codifican factores inhibitorios de la apoptosis durante la infección. El BoHV-4 posee dos genes (ORF16 y ORF71) que codifican las proteínas v-Bcl2 y v-Flip, respectivamente. Si bien está comprobado que estas proteínas virales no poseen actividad proapoptótica, según los resultados de algunos ensayos experimentales in vitro, la infección con BoHV-4 podría inducir apoptosis mediante diferentes procesos. Debido a lo controvertido de estos resultados, es importante estudiar los genes que se asocian con la capacidad de BoHV-4 de inducir o inhibir la apoptosis en células infectadas. El objetivo de este trabajo fue analizar los genes v-Flip y v-Bcl2 de seis aislamientos locales de BoHV-4 filogenéticamente divergentes, clasificados como genotipos 1 (tipo Europeo), 2 (tipo Americano) y 3 (nuevo genotipo), para determinar si existen diferencias genéticas entre las distintas cepas. Las cepas de BoHV-4 se propagaron en células MDBK, se extrajo el ADN y se amplificaron e ambos genes mediante PCR: BoHV-4- vBcl2-F 5´ tgggctattaaccaccttgc 3´, BoHV-4- vBcl2- R 5´ aggtggtctccacaatcagg 3´ (producto: 416 pb) y BoHV-4- vFlip -F 5´ ctggtcctaccatggcaact 3´, BoHV-4- vflip -R 5´ taccagggatgtgttgcttg 3´ (product0: 437 pb). Fue posible amplificar ambos genes en las cepas 09/508 (genotipo 1), 12/365 (genotipo 2) y las cepas 09/227 y 07/435 (genotipo 3). No fue posible amplificar ninguno de los dos genes en las cepas 08/263 y 08/330 (genotipo 2). El análisis de la secuenciación y alineamiento reveló que l v-Bcl2 de las cepas del genotipo 3 (09/227 y 07/435) presentó 13 sitios variables, mientras que en las cepas 09/508 y 12/365 se identificaron tres sustituciones. En las cepas 09/227 y 07/435 también se detectaron dos sustituciones aminoácidicas. En el alineamiento del gen v-Flip se detectaron 15 sustituciones, para las cepas 09/227 y 07/435; en la cepa 09/508 se hallaron 12 sustituciones y la cepa 12/365 presentó ocho sustituciones. En la proteína v-Flip se evidenciaron siete sustituciones aminoacídicas en las cepas del genotipo 3 y cinco en las cepas 09/508 y 12/365. Los resultados de este estudio demostraron que existen variaciones en los genes vflip y vbcl2 asociadas al genotipo viral lo cual podría influir en la capacidad para inducir apoptosis y manifestarse en distintas características biológicas de los distintos aislamientos locales de BoHV-4. Esto también podría asociarse con distintos comportamientos de las cepas in vivo.