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dc.contributor.author
Amaranto, Marilla
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dc.contributor.author
Vaccarello, Paula
dc.contributor.author
Correa, Elisa María Eugenia
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dc.contributor.author
Barra, Jose Luis
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dc.contributor.author
Godino, Agustina
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dc.date.available
2022-08-17T14:50:53Z
dc.date.issued
2021-05
dc.identifier.citation
Amaranto, Marilla; Vaccarello, Paula; Correa, Elisa María Eugenia; Barra, Jose Luis; Godino, Agustina; Novel intein-based self-cleaving affinity tag for recombinant protein production in Escherichia coli; Elsevier Science; Journal of Biotechnology; 332; 5-2021; 126-134
dc.identifier.issn
0168-1656
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/165821
dc.description.abstract
We evaluated several intein-based self-cleaving affinity tags for expression and single-step affinity chromatography purification of recombinant proteins produced in Escherichia coli. We used human growth hormone (hGH) as target protein that contains two internal disulfide bridges and an N-terminal phenylalanine. Use of N-terminal thiol-induced Sce VMA1 intein affinity tag resulted in purified hGH deficient in disulfide bonds. Inteins with self-cleavage inducible by pH and/or temperature shift were analyzed. N-terminal Ssp DnaX intein affinity tag resulted in a completely cleaved cytosolic protein, whereas N-terminal Ssp DnaB intein affinity tag resulted in a cytosolic fusion protein incapable of releasing hGH. Periplasmic expression of target protein was analyzed using an N-terminal signal peptide and C-terminal Ssp DnaX pH-inducible self-cleaving affinity tag. The fusion protein was properly expressed in pH 8 buffered culture medium. Fusion of a periplasmic signal peptide to the N-terminus of the POI allowed secretion to the periplasmic region and presence of the natural N-terminal amino acid of the POI following cleavage. Periplasmic expression of hGH fused to this novel C-terminal DnaX intein-based self-cleaving affinity tag made possible expression and purification of hGH protein containing disulfide bonds and free of extra amino acids.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
eng
dc.publisher
Elsevier Science
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dc.rights
info:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject
DISULFIDE BOND
dc.subject
DNAX
dc.subject
ESCHERICHIA COLI
dc.subject
HGH
dc.subject
INTEIN
dc.subject
PERIPLASMIC
dc.subject.classification
Biología Celular, Microbiología
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dc.subject.classification
Ciencias Biológicas
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dc.subject.classification
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
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dc.title
Novel intein-based self-cleaving affinity tag for recombinant protein production in Escherichia coli
dc.type
info:eu-repo/semantics/article
dc.type
info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated
2022-08-08T15:44:02Z
dc.journal.volume
332
dc.journal.pagination
126-134
dc.journal.pais
Países Bajos
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dc.journal.ciudad
Amsterdam
dc.description.fil
Fil: Amaranto, Marilla. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina
dc.description.fil
Fil: Vaccarello, Paula. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina
dc.description.fil
Fil: Correa, Elisa María Eugenia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina
dc.description.fil
Fil: Barra, Jose Luis. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina
dc.description.fil
Fil: Godino, Agustina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina
dc.journal.title
Journal of Biotechnology
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dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0168165621001085
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2021.04.003
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