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dc.contributor.author
Adrover, Martín Federico
dc.contributor.author
Muñoz, Manuel Javier
dc.contributor.author
Baez, Maria Veronica
dc.contributor.author
Thomas, J.
dc.contributor.author
Kornblihtt, Alberto Rodolfo
dc.contributor.author
Epstein, Alberto Luis
dc.contributor.author
Jerusalinsky, Diana Alicia
dc.date.available
2017-05-11T18:55:37Z
dc.date.issued
2010-12
dc.identifier.citation
Adrover, Martín Federico; Muñoz, Manuel Javier; Baez, Maria Veronica; Thomas, J.; Kornblihtt, Alberto Rodolfo; et al.; Characterization of specific cDNA background synthesis introduced by reverse transcription in RT-PCR assays; Elsevier France-editions Scientifiques Medicales Elsevier; Biochimie; 92; 12; 12-2010; 1839-1846
dc.identifier.issn
0300-9084
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/16323
dc.description.abstract
To block expression of NMDA receptor NR1 subunit, we injected into rat hippocampus a Herpes Simplex Virus type 1 derived vector bearing a sequence for NR1 antisense. RT-PCR assays with RNA from hippocampus of animals injected either with NR1 antisense vector, control vector or vehicle, showed an amplification signal compatible with NR1 antisense which could be attributed either to an endogenous NR1 antisense or to an artifact. RT-PCR was performed either with different primers or without primers in the RT, using RNA from different tissues. RNAse protection assay was carried out to characterize the amplified signal nature. Our results show that the template for the unexpected amplified fragment was NR1 mRNA currently expressed in nervous tissue. We considered this basal amplification of a mRNA in a RT-PCR assay as "background amplification". After background subtraction, a significant signal only remained when samples from NR1 antisense vector injected animals were used, demonstrating that this was the only source for NR1 antisense. Background amplification at RT in the absence of primers, can constitute a troubling factor in quantitative nucleic acid determination, leading to major interference, particularly when both sense and antisense sequences are present in the sample. Since RT introduced a significant background signal for every gene analyzed, we propose that RT must be always performed also without primers. Then, this signal should be identified, quantified and subtracted from the specific reaction amplification signal.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
eng
dc.publisher
Elsevier France-editions Scientifiques Medicales Elsevier
dc.rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
dc.subject
Antisense Rna
dc.subject
Background Synthesis
dc.subject
Hsv-1 Vectors
dc.subject
Reverse Transcription
dc.subject
Rt-Pcr
dc.subject.classification
Bioquímica y Biología Molecular
dc.subject.classification
Ciencias Biológicas
dc.subject.classification
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
dc.title
Characterization of specific cDNA background synthesis introduced by reverse transcription in RT-PCR assays
dc.type
info:eu-repo/semantics/article
dc.type
info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated
2017-05-10T19:59:47Z
dc.journal.volume
92
dc.journal.number
12
dc.journal.pagination
1839-1846
dc.journal.pais
Francia
dc.journal.ciudad
París
dc.description.fil
Fil: Adrover, Martín Federico. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Biología Celular y Neurociencia "Prof. Eduardo de Robertis". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular y Neurociencia ; Argentina
dc.description.fil
Fil: Muñoz, Manuel Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiologia, Biologia Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiologia y Biologia Molecular; Argentina
dc.description.fil
Fil: Baez, Maria Veronica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Biología Celular y Neurociencia "Prof. Eduardo de Robertis". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular y Neurociencia ; Argentina
dc.description.fil
Fil: Thomas, J.. Centre de Génétique Moléculaire et Cellulaire; Francia. Centre National de la Recherche Scientifique; Francia
dc.description.fil
Fil: Kornblihtt, Alberto Rodolfo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiologia, Biologia Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiologia y Biologia Molecular; Argentina
dc.description.fil
Fil: Epstein, Alberto Luis. Centre de Génétique Moléculaire et Cellulaire; Francia. Centre National de la Recherche Scientifique; Francia
dc.description.fil
Fil: Jerusalinsky, Diana Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Biología Celular y Neurociencia "Prof. Eduardo de Robertis". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular y Neurociencia ; Argentina
dc.journal.title
Biochimie
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0300908410002944
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/http://dx.doi.org/10.1016/j.biochi.2010.07.019
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