Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19

Abstract

La inmunoterapia pasiva como tratamiento contra el virus SARS-CoV-2 (del inglés, severe acute respiratory syndrome coronavirus-2) requiere de la cuantificación de la capacidad neutralizante de los anticuerpos para el desarrollo de terapias efectivas. Para ello, es necesario el uso de partículas virales pseudotipadas no replicativas. Sin embargo, los reactivos de transfección necesarios para su producción son costosos y, en consecuencia, resulta una limitante al momento de escalar la producción. Una manera de eludir esta limitante es el uso de la polietilenimina (PEI), un polímero catiónico de bajo costo. El objetivo del trabajo consistió en optimizar un ensayo de transfección transitoria de bajo costo para producir pseudopartículas virales que expresen la proteína Spike del virus SARSCoV-2. Se realizaron ensayos de transfección en células HEK-293T evaluando diferentes concentraciones de PEI y tiempos de incubación. La transfección se evaluó mediante microscopía de epifluorescencia y citometría de flujo, mostrando que la condición de transfección que tiende a arrojar mejores resultados fue luego de 48 horas de incubación utilizando una relación 1/10 (ADNp/PEI). En conclusión, se ha logrado adaptar un protocolo para producir partículas lentivirales que expresan Spike utilizando un reactivo de transfección de bajo costo. Esto permitiría escalar la producción para, posteriormente, diseñar una plataforma para evaluar terapias para COVID-19.

Passive immunotherapy as a treatment against SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus-2) requires to quantify neutralizing capacity of antibodies for development of effective therapies. However, the transfection reagents necessary for its production are expensive and, consequently, it is a limitation for the scaling up production. Using of polyethyleneimine (PEI), a lowcost cationic polymer, allows to avoid this. The objective of this work was to optimize a low-cost transient transfection assay to produce pseudoparticles that express the Spike protein of SARS-CoV-2. Transfection assays were performed in HEK-293T cells treated with different PEI concentrations and evaluating different incubation times. Transfection was assesed by epifluorescence microscopy and flow cytometry, showing that the transfection condition that tends to yield better results was after 48 hours of incubation using a 1/10 ratio (pDNA / PEI). In conclusion, it has been possible to adapt a protocol to produce spike-expressing lentiviral particles using a low-cost transfection reagent. This would allow to scale up the production and, following, to design a platform for evaluation of COVID-19 therapies.