Resumen
El carcinoma de células renales (CCR) representa el 3% de los tumores del Adulto y el 95% de las neoplasias malignas del riñón. Aproximadamente al 30% de los pacientes que se les practica la resección quirúrgica, desarrollan metástasis. Debido al incremento en la detección de tumores, con el uso de técnicas de imagen no invasiva, se encuentran un número creciente de CCR incidentales. En el año 2004, la Organización Mundial de la Salud, reportó tres subtipos histológicos más frecuentes de CCR: Células claras, el cual se desarrolla en las células del túbulo proximal (80-90%), papilar (10-15%) y cromófobo (4-5%).
El CCR es considerado uno de los tumores más vascularizados de los tumores adultos y esto es debido a alteraciones en gen supresor del tumor Von Hippel Lindau (VHL). El gen VHL está inactivo por hiper-metilación o mutación en el 75% de los tumores a células claras del CCR. Otra característica muy importante del CCR es que no responde a la radioterapia y quimioterapia convencional, hoy en día se están utilizando inhibidores de tirosina quinasas (ITK) como son: Sorafenib, Pazopanib, Sunitinib y Axitinib con efecto principalmente anti-angiogénico, inhibiendo la señalización de VEGF (en la célula endotelial). Y Everolimus inhibiendo mTOR (en la célula tumoral), aunque se utilizan en forma combinada. Se caracterizan por provocar efectos colaterales. Por otro lado, también podría ser utilizada la inmunoterapia. Sin embargo, no existe un marcador tisular que oriente la terapéutica del cáncer renal avanzado.
En la relación de los receptores de EGF y el cáncer renal se ha publicado que, EGFR (HER1) se encuentra expresado entre el 50 y 90% de los tumores renales, también se reportó expresión de ErbB-3. El oncogén ErbB2, se expresa en el riñón fetal e hiperplasia tubular, sin embargo, es dudosa su implicación en el tumor renal sobre todo en su localización de membrana. Nosotros encontramos que en el cancer renal ErbB-2 se expresa en la membrana de las células solo en el fenotipo de celulas claras, sin embargo no encontramos relación clínica. Hemos visto que podría ser regulado por HIF2/EPAS1 en este tumor donde VHL esta inactivo.
Otro mecanismo de acción de ErbB2 es el núcleo celular (NErbB2) que induce a proliferación y metástasis en cáncer de mama, el grupo de Patricia Elizalde publicó por primera vez, el papel oncogénico de ErbB-2 en el núcleo celular en cáncer de mama triple negativos. Los mecanismos moleculares de NErbB2 fueron publicados en mama por la Dra. Patricia Elizalde en donde ErbB-2 se dirige al núcleo con ErbB-3 en el fenotipo de cáncer de mama triple negativo.
Nosotros encontramos que ErbB-2 se ubica en el nucleo de las celulas y se relaciona con el grado nuclear de Fuhrman. Por ello hemos evaluado la relación de ErbB-2 y ErbB-3 nuclear, hemos observado in vitro, que ErbB-2 se dirige al núcleo celular en asociación con ErbB-3. Tambien estudiamos su relación con EGFR que se encuentra expresado en el cancer renal, y pudimos observar que en 40 muestras testadas ErbB- 2 no se relaciona a nivel de membrana ni con ErbB-3 ni con EGFR. Sin embargo, a nivel nuclear, ErbB-2 se relaciona con ErbB-3 (en concordancia con los estudios invitro realizados) y también con EGFR.
Con respecto al cáncer de ovario, se conoce que los ErbBs están presentes sin embargo recientemente se publicó que la expresión de ErbB-2 en membrana está relacionada con un mal pronóstico. No se conoce la implicación de ErbB-2 a nivel nuclear. Los receptores ErbBs están planteados como dianas de nuevas terapias en el CA de ovario actualmente no se utilizan inhibidores de estos receptores. Como resultados preliminares hemos reclutado 30 casos y realizado la IHQ de ErbB-2 en 24 de las muestras. Hemos visto que, en nuestra población ErbB-2 no se localiza en la membrana solo tenemos 2+. Sin embargo, si se encuentra en un alto porcentaje en el núcleo tanto 3+, como 2+ y 1+. Hemos correlacionado con el grado del tumor y no obtuvimos diferencias significativas con esta cohorte.
Postulamos que NErbB2 en dichos estadios avanzados podría estar involucrada en la proliferación de estos tumores, en el desarrollo de metástasis lo cual conduciría al mal pronóstico de dichos pacientes.
Información Técnica
Muestras de pacientes. Se reclutaron 100 muestras del centro del tumor de pacientes con Carcinoma renal, fijadas en formol e incluidas en parafina provenientes del Servicio de Anatomía Patología del Hospital JR Vidal y el Hospital escuela de la Ciudad de Corrientes, con aprobación ambos comités. A su vez, se reclutaron muestras del centro del tumor de pacientes con Cáncer de Ovario, fijadas en formol e incluidas en parafina. Provenientes del Servicio de Anatomía Patología Hospital JR Vidal de la Ciudad de Corrientes, con aprobación del comité para obtener las muestras con consentimiento informado y retrospectivamente codificadas, junto con los datos asociados: estadio y diagnóstico antomopatológico. Lo que hace un total de 42 muestras reclutadas hasta el momento sumadas las obtenidas en el periodo anterior.
Métodos
Líneas celulares y tratamientos: Se usaron las líneas HEK293 (renal embrionaria) y 786-O (carcinoma renal de células claras). Fueron obtenidas de la ATCC-USA. Fueron privadas de suero por 24hs y luego tratadas con HRG a 40ng/ml por 1hs para experimentos de inmunoflurescencia y por 15min para western bloting.
Inmunohistoquímica. En cortes de 2 micras, después de desparafinar e hidratar, se realizó la exposición antigénica con Proteinasa K pH8 (10ug/ml). Se bloquéo: la peroxidasa endógena con 3% H2O2 en metanol y el tejido con albúmina bovina al 2%. Se incubó con anti–ErbB-2(3B5) (Pierce) monoclonal durante toda la noche. Se incubó con anti-mouse / anti-rabbit y Streptavidina (Kit vector Elite). Se reveló con DAB (Vector Elite) y se contratiñó con Hematoxilina. Se observó en el microscopio óptico y las fotos se obtuvieron en una magnificación de 400X.
Inmunofluorescencia. Se siguió el protocolo según Schillaci et al. BMC cáncer 2012; 12:74. Se incubó con anti–ErbB-2(C18) (Santa Cruz) y anti- ErbB3 (RTJ2- Thermo Fisher) durante toda la noche. Se incubó con anti-rabbit y anti- mouse IgG Alexa Fluor 488 y 546 (molecular probes-Thermo Fisher) y los núcleos se tiñeron con DAPI. Se observó en el microscopio confocal Nikon Eclipse E800 y las fotos se obtuvieron en una magnificación de 400X.
Western Blot. Se siguió el protocolo según Beguelin W et al. Mol. Cell Biol. 2010; 30:56-72.
Análisis de los datos. Se utilizó el programa Graphpad Prism 6. Para la correlación entre las variables se realizó utilizando el test X2. Y el Office Excell para el diseño de graficos.
Otro
1- ErbB-2 expression in Renal Cell Carcinoma (RCC)
2- Clear Cell Renal Cell Carcinoma (cRCC)/ MErbB-2 expression in 90 cases of cRCC.
3- Clear Cell Renal Cell Carcinoma (cRCC)/ NErbB-2 expression in 85 cases of cRCC
4- Relatioship between ErbB-2 with hipoxia genes (EPO receptor)
5- Clear Cell Renal Cell Carcinoma (cRCC)/ Relatioship between ErbB-2 with hipoxia genes (HIF1)
6- Relatioship between ErbB-2 with hipoxia genes (HIF2/EPAS)
7- Relationchip between MErbB-2 with Patient´s Estatus
8- Relationship between NErbB-2 with
survival / Relationship between NErbB2 with Furman Nuclear
Grade (FNG) in cRCC
9- Molecular mechanisms of NErbB-2 in cRCC /Association of ErbB-2 with ErbB-3 in the cell nucleus in vitro
10- Association of ErbB-2 with EGFR and ErbB-3, in the cell nucleus of human samples
11- Ovarian Cancer /ErbB-2 expression in human samples of Ovarian Cancer
12- Ovarian Cancer / ErbB-2 expression in human samples of Ovarian Cancer