Aislamiento y purificación de polisacáridos del cultivo líquido de Ganoderma sessile

Abstract

El género Ganoderma incluye a una variedad de especies de hongos basidiomicetes mundialmente apreciados por sus numerosas propiedades medicinales, entre las cuales se destaca la inmunomodulación, actividad principalmente atribuida a los polisacáridos. Entre los métodos de cultivo de hongos, la fermentación en estado líquido resulta efectiva para la producción de estas macromoléculas debido a su rapidez y buenos rendimientos (Zhou y col., 2012). En estudios previos, la cepa G. sessile E47 presentó rendimientos de polisacáridos superiores a los de otras cepas de Ganoderma spp. (Viceconte y col. 2021) así como tiempos de cultivo menores. Los objetivos de este trabajo fueron la extracción y purificación de los polisacáridos de esta cepa a los fines de caracterizar el producto y compararlo con los polisacáridos de las cepas medicinales G. lucidum y G. lingzhi.Los polisacáridos de G. sessile E47 se aislaron del sobrenadante del cultivo líquido mediante precipitación con el agregado de 4 volúmenes de etanol y posterior centrifugación. Luego de su liofilización, el extracto crudo fue sometido a desengrasado en frío con acetona. Las proteínas se eliminaron del extracto por precipitación con ácido tricloroacético 24% p/v (1:1). Posteriormente, el sobrenadante fue dializado contra agua corriente y destilada en membrana de diálisis (cut-off 14000 Da). El perfil de polisacáridos se obtuvo mediante separación del extracto en una columna cromatográfica de intercambio aniónico (DEAE-celulosa, fase móvil: agua destilada y NaCl 0.05 a 0.5 M). Las fracciones obtenidas se concentraron, dializaron y liofilizaron para obtener su peso seco, y finalmente se sometieron a purificación en cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex G-200, fase móvil: NaCl 0.2 M). El monitoreo de la presencia de carbohidratos en las alícuotas recolectadas se realizó en todos los casos mediante reacción con fenol- ácido sulfúrico y posterior medición de la absorbancia a 490 nm. El perfil de elución obtenido en la columna de DEAE-celulosa mostró la presencia de al menos tres tipos diferentes de polisacáridos, similar a lo reportado para G. lucidum (Li y col., 2016), con un rendimiento total de 53.3% de polisacáridos purificados respecto al extracto crudo determinado por gravimetría. Las fracciones evidenciaron la presencia de polisacáridos de alto peso molecular mediante cromatografía de filtración en gel. Los resultados obtenidos demuestran que el perfil de polisacáridos de G. sessile E47, resultó similar a los perfiles de las especies medicinales.