Producción y caracterización de anticuerpos de yema de huevo (IgY) contra Salmonella ser: Newport de origen equino

Abstract

Argentina es uno de los países con mayor desarrollo de la producción hípica relacionada con la exportación de animales puros de raza y deportes ecuestres. Los cuadros de diarrea se ubican entre las patologías de mayor impacto en el equino y son motivo de extensas pérdidas económicas relacionadas con los costos de los tratamientos y la mortalidad. Salmonella es uno de los principales agentes productores de enterocolitis y cuadros diarreicos en equinos de todas las edades, describiéndose a las serovariedades Typhimurium, Newport, Anatum y Agona como las prevalentes a nivel mundial. En los últimos años se han aislado cepas multirresistentes de Salmonella, dificultando la terapéutica de la enfermedad y, por lo tanto, la búsqueda de alternativas es una temática emergente a nivel mundial. La Tecnología IgY se presenta como una opción prometedora para la prevención y el tratamiento específicos que disminuyan y/o reemplacen el empleo de antibióticos. La misma se basa en la producción de anticuerpos que se extraen de los huevos de gallinas ponedoras y pueden ser administrados por vía oral para inmunizar en forma pasiva a los animales tratados. Objetivos: producir y caracterizar anticuerpos de yema de huevo (IgY) contra Salmonella ser. Newport aislada de equinos. Luego del estudio de las cepas de Salmonella aisladas de equinos en la FCV-UBA, se seleccionó la cepa de Salmonella ser. Newport UBA 1293/16 como antígeno por obtenerse patrones electroforéticos similares a otras cepas aisladas de equinos y humanos en Argentina. La bacteria fue cultivada en medio líquido y posteriormente inactivada. Se ajustó su concentración al 1 MF y se emulsionó con adyuvante de Freund (AF) ó con un adyuvante de la línea Montanide® (M). Se llevó a cabo un plan de inmunización estandarizado y avalado por el CICUAE del CICVyA-INTA, empleando 2 gallinas para cada uno de los adyuvantes. La 1era inoculación se realizó con AF completo para ambos grupos de gallinas, inoculando 0,25 mL s.c. y 0,25 mL i.m. Posteriormente y cada 2 semanas, se realizaron 4 inmunizaciones con AF incompleto y con M por vía i.m. Una semana luego de cada inmunización, se extrajo sangre a partir de la vena alar para evaluar el título específico contra Salmonella ser. Newport mediante microaglutinación lenta en placa de 96 pocillos. Se recolectaron los huevos y las inmunoglobulinas se purificaron mediante precipitación con sulfato de amonio. Se determinó la concentración de proteínas de los extractos mediante el método de Bradford y el título mediante microaglutinación. Además, se evaluó la actividad in vitro contra Salmonella mediante inhibición de crecimiento bacteriano en agar semisólido. Se obtuvieron resultados similares en los títulos de anticuerpos en ambos grupos. La hiperinmunización de los animales se alcanzó con la 4ta inoculación, con títulos de microaglutinación > 1:10240. Se obtuvieron extractos de yema de ambos grupos de gallinas post 3era, 4ta y 5ta inoculación con concentraciones proteicas que variaron entre 157,30 y 288,2 mg/mL y títulos específicos entre 1:10240 y 1:20480. Respecto a la actividad anti-Salmonella de los extractos, se observó inhibición específica del crecimiento bacteriano utilizando distintas diluciones de los mismos. Se logró producir anticuerpos IgY contra la serovariedad estudiada y los títulos fueron similares para ambos adyuvantes evaluados lo que indica la posibilidad de utilizar el adyuvante comercial para la producción de estas inmunoglobulinas. Los anticuerpos tuvieron la capacidad de inhibir el crecimiento de la bacteria. Futuros estudios deberían evaluar la eficacia de estos anticuerpos en modelos animales para determinar la factibilidad de desarrollo de productos basados en la Tecnología IgY destinados al control de la diarrea equina, tanto en forma profiláctica como terapéutica.