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dc.contributor.author
Salcedo, Mariana
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dc.contributor.author
Gonzalez, Hermida P.
dc.contributor.author
Abrey Recalde, J.
dc.contributor.author
Oliver, Javier
dc.contributor.author
Frecha, Cecilia Ariana
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dc.date.available
2022-04-08T15:25:11Z
dc.date.issued
2019
dc.identifier.citation
Diseño y producción de vectores lentivirales para modular la expresión de genes involucrados en la inmunosupresión; XXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; Cordoba; Argentina; 2018; 1-2
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/154758
dc.description.abstract
La proteína STUB1 fue recientemente caracterizada como una enzima de tipo E3 ligasa, capaz de promover la degradación del factor de transcripción FOXP3 de manera específica. Es ampliamente conocido que FOXP3 tiene un rol clave en la diferenciación de células T regulatorias y por lo tanto en procesos de inmunosupresión. Además, se ha visto que STUB1 está sobreexpresada en algunas células tumorales cuya función en ellas es aún desconocida. Nos planteamosinvestigar si la administración de STUB1 en células T podría tener un efecto en los niveles de inmunosupresión. Entre las herramientas de transferencia genética más adecuadas para la expresión de genes en células hematopoyéticas se encuentran los vectores lentivirales. El objetivo de este trabajo es diseñar un vector lentiviral de expresión de STUB1 humana. En primer lugar, se estudió la expresión de STUB1 en las líneas celulares tumorales HEK293T y HeLa. Por RT-PCR se comprobó la presencia de RNA mensajero de STUB1 en células derivadas de cáncer cérvico-uterino. A partir del diseño de primers específicos con sitios de enzimas de restricción se aisló el cDNA de STUB1 y se clonó en un plásmido lentiviral autoinactivable (SIN), río abajo del promotor ubicuo EF1alfa, seguido por una secuencia IRES y la secuencia del gen reportero GFP (LV-STUB1). Los plásmidos se amplificaron por transformación en bacterias E. Coli competentes (TOP10), seleccionándose los clones positivos por PCR colony. Posteriormente, se comprobó la presencia del inserto mediante corte con enzimas de restricción específicas y se confirmó la correcta secuencia y orientación del cDNA de STUB1 por secuenciación. Los vectores lentivirales se produjeron en células productoras HEK293T. Se realizó una cotransfección de tres plásmidos: plásmido empaquetador portando los genes gag-pol, plasmido que codifica para la envuelta del virus de la stomatitis vesicular (VSVG), y aquél con la secuencia de STUB1IRESGFP. Se optimizó el método de transfección utilizando el sistema PEI, en preferencia a otros sistemas testeados (CaCl2, Lipofectamina). Los vectores lentivirales fueron recolectados al día 2 de la transfección y preservados -80 grados para su posterior utilización en células target. Se testeó la eficiencia de transducción de las partículas lentivirales en células Jurkat E6-1. Los niveles de GFP se midieron por Citometría de Flujo, 72h post transducción. Los resultados obtenidos demuestran que el vector LV- STUB1 es capaz de transducir más del 35% de las células a una multiplicidad de infección de 0.5 vectores/célula (MOI: 0.5), sin afectar la viabilidad celular. Estos resultados sugieren que sería posible obtener una mayor expresión del transgén a MOIs más altas. Los próximos experimentos incluyen la validación funcional del transgén y la optimización delvector para su utilización en modelos de inmunosupresión.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
spa
dc.publisher
Sociedad Argentina de Virología
dc.rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject
Vectores lentivirales
dc.subject
Cancer escamoso de cabeza y cuello
dc.subject
inmunoregulacion
dc.subject
TILs
dc.subject.classification
Tecnologías que involucran la manipulación de células, tejidos, órganos o todo el organismo
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dc.subject.classification
Biotecnología de la Salud
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dc.subject.classification
CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD
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dc.title
Diseño y producción de vectores lentivirales para modular la expresión de genes involucrados en la inmunosupresión
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type
info:eu-repo/semantics/conferenceObject
dc.type
info:ar-repo/semantics/documento de conferencia
dc.date.updated
2022-03-16T19:18:43Z
dc.journal.pagination
1-2
dc.journal.pais
Argentina
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dc.journal.ciudad
Ciudad Autonoma de Buenos AIres
dc.description.fil
Fil: Salcedo, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Medicina Traslacional e Ingeniería Biomédica - Hospital Italiano. Instituto de Medicina Traslacional e Ingeniería Biomédica.- Instituto Universitario Hospital Italiano de Buenos Aires. Instituto de Medicina Traslacional e Ingeniería Biomédica; Argentina
dc.description.fil
Fil: Gonzalez, Hermida P.. Hospital Italiano; Argentina
dc.description.fil
Fil: Abrey Recalde, J.. Hospital Italiano; Argentina
dc.description.fil
Fil: Oliver, Javier. Hospital Italiano; Argentina
dc.description.fil
Fil: Frecha, Cecilia Ariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Medicina Traslacional e Ingeniería Biomédica - Hospital Italiano. Instituto de Medicina Traslacional e Ingeniería Biomédica.- Instituto Universitario Hospital Italiano de Buenos Aires. Instituto de Medicina Traslacional e Ingeniería Biomédica; Argentina
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://www.aam.org.ar/src/img_up/29112018.0.pdf
dc.conicet.rol
Autor
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dc.coverage
Nacional
dc.type.subtype
Reunión
dc.description.nombreEvento
XXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología
dc.date.evento
2018-12-05
dc.description.ciudadEvento
Cordoba
dc.description.paisEvento
Argentina
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dc.type.publicacion
Journal
dc.description.institucionOrganizadora
Sociedad Argentina de Virologia
dc.source.revista
Sociedad Argentina de Virología
dc.date.eventoHasta
2018-12-07
dc.type
Reunión
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