Partial characterization and response under hyperregulating conditions of Na+-K+ ATPase and levamisole-sensitive alkaline phosphatase activities in chela muscle of the euryhaline crab Cyrtograpsus angulatus

Abstract

En el presente trabajo se estudió la presencia, características y respuesta a la salinidad ambiental de las actividades de Na+-K+ ATPasa y fosfatasa alcalina (AP) levamisol-sensible en el músculo de la quela del cangrejo eurihalino Cyrtograpsus angulatus. El músculo de la quela exhibió una actividad de Na+-K+ ATPasa marcadamente dependiente de la concentración de ATP, pH y temperatura del medio de reacción. La actividad fue máxima a 1 mM de ATP, 30-37ºC y a pH 7.4. La actividad de AP levamisol-sensible se caracterizó parcialmente a pH fisiológico (pH 7.4) y a pH 8.0. La I50 fue de 8.8 y 8.0 mM de levamisol a pH 7.4 y 8.0 respectivamente. A ambos pH la actividad de AP levamisol-sensible exhibió una cinética michaeliana (Km=3.451 y 6.606 mM de pNPP, respectivamente). Las actividades de AP levamisol-sensibles fueron fuertemente afectadas por la temperatura, exhibiendo un pico a 37ºC. En cangrejos aclimatados a baja salinidad (10) (condiciones de hiperregulación), las actividades de Na+-K+ ATPasa y de AP levamisol-sensible a pH fisiológico fueron mayores que a 35 de salinidad (condiciones de osmoionoconformación). La respuesta a baja salinidad sugiere que ambas actividades serían componentes de los mecanismos regulatorios a nivel bioquímico secundarios a la hiperregulación en C. angulatus. El estudio de estas actividades contribuye a un mejor conocimiento de los complejos mecanismos bioquímicos en el proceso adaptativo bajo condiciones de hiperregulación de cangrejos eurihalinos.

The occurrence, characteristics and response to changes in environmental salinity of Na+-K+ ATPase and levamisole-sensitive alkaline phosphatase (AP) activities were studied in chela muscle of the euryhaline crab Cyrtograpsus angulatus. Chela muscle exhibited an Na+-K+ ATPase activity which was strongly dependent on ATP concentration, pH and temperature of the reaction mixture. Maximal activity was found at 1 mM ATP, 30-37ºC and pH 7.4. Levamisole-sensitive AP activity was characterised at physiological pH 7.4 and at pH 8.0. I50 for levamisole-sensitive AP activity was 8.8 mM and 8.0 mM at pH 7.4 and 8.0, respectively. At both pH levels, levamisole-sensitive AP activity exhibited Michaelis-Menten kinetics (Km=3.451 mM and 6.906 mM at pH 7.4 and 8.0, respectively). Levamisole-sensitive AP activities were strongly affected by temperature, exhibiting a peak at 37ºC. In crabs acclimated to low salinity (10; hyperegulating conditions), Na+- K+ ATPase activity and levamisole-sensitive AP activity at the physiological pH were higher than in 35 psu (osmoconforming conditions). The response to low salinity suggests that both activities could be components of muscle regulatory mechanisms at the biochemical level secondary to hyperegulation of C. angulatus. The study of these activities under hyperegulating conditions contributes to a better understanding of the complexity of biochemical mechanisms underlying the adaptive process of euryhaline crabs.