Coronavirus canino como virus modelo para la evaluación de actividad antiviral de productos

Abstract

Introducción. Para evaluar los productos y/o procesos de manufactura respecto de su capacidad para inactivar o remover agentes virales, deben realizarse ensayos a escala laboratorio donde se contamina un material inicial con altas dosis infecciosas de distintos virus modelo, luego se aplica el producto o proceso a evaluar, y posteriormente se determina el virus remanente. El diseño del ensayo de validación debe realizarse de acuerdo al producto o proceso a evaluar, a la normativa nacional e internacional vigente, y de acuerdo a requerimientos específicos de cada elaborador. Para esto, pueden utilizarse distintos virus modelo, con distintas propiedades estructurales, de tamaño y de material genético.En los últimos años muchos productos con propiedades antivirales han sido estudiados y desarrollados y se han establecido los métodos para evaluar su efectividad. En el contexto de la actual pandemia COVID19, el Coronavirus Canino (CCoV) fue seleccionados como virus modelo de SARS-CoV-2, para la estandarización de ensayos de validación. El virus CCOV pertenece a la Familia Coronaviridae, es un virus envuelto de ARN simple cadena. En este estudio pusimos a punto diferentes ensayos de acuerdo a la normativa internacional para la evaluación de actividad antiviral de textiles y productos no-absorbentes usando el modelo de Coronavirus Canino. Materiales y Métodos. Se contaminaron áreas de ensayo del producto con actividad antiviral (TRATADO) con la suspensión de CCoV, luego de una incubación a diferentes tiempos a temperatura ambiente y humedad controlada, se recuperó el virus lavando las áreas de ensayos con diferentes medios neutralizantes. Areas de ensayo sin tratamiento antiviral (CONTROL) fueron contaminadas con la suspensión de CCoV para evaluar la posible inactivación viral sin tratamiento. Una fracción del stock viral original de CCoV utilizado en la contaminación experimental fue ensayada simultáneamente con el resto de las muestras. Sobre cada una de las muestras tomadas, se realizaron ensayos de titulación viral por dosis infecciosas 50% en cultivo de tejidos (TCID50), utilizando el estimador estadístico de Reed y MuenchResultados. La infectividad viral de CCoV fue afectada por las condiciones experimentales tales como la concentración del stock viral, lel tiempo de contacto, el tipo de superficie, entre otros. Se estableció la relación de 100 µl/cm2 de stock viral concentrado por área de superficie de prueba. Las incubaciones se hicieron en presencia de alta humedad relativa. El mejor medio neutralizante resultó el medio de cultivo E+D con 2% de suero fetal bovino. Concusión. El CCOV se puede inactivar por contacto con el producto a evaluar, incluso en ausencia de agentes antivirales, por lo que es fundamental incluir controles de superficies sin tratamiento. Estos hallazgos indican que las condiciones de ensayo de evaluación de actividad antiviral deben elegirse cuidadosamente teniendo en cuenta el tipo de producto.