Comparación de métodos de extracción de ADN simples y económicos para el diagnóstico molecular de leptospirosis animal

Abstract

La leptospirosis bovina es una importante enfermedad zoonótica cuyo diagnóstico molecular está ampliamentedivulgado. Sin embargo, no existe un método único de extracción de ADN para leptospiras patógenas a partir de muestras clínicas. Eneste trabajo se utilizó orina bovina contaminada con cultivo de Leptospira interrogans serovar Pomona Pomona para analizar el mejormétodo comparando: M1.) resina Chelex-100, M2.) papel FTA Whatman y M3.) hervido de la muestra (protocolo casero). De estas trestécnicas, la primera (M1) presentó la mayor sensibilidad al realizar la PCR de diagnóstico, detectándose hasta 2x102leptospiras/mL. Lametodología aquí planteada resultó tener buen rendimiento para la detección de leptospiras en muestras clínicas animales, aunque esnecesario su validación con mayor número y diversidad de muestras.

Bovine leptospirosis is an important zoonotic disease whose molecular diagnosis is widely reported. However, there is not a unique method of extraction of DNA for pathogenic leptospires using clinical samples. In this study, bovine urine was contaminated with pure culture of Leptospira interrogans serovar Pomona Pomona in order to compare three of them: M1.) Chelex-100 resin, M2.) FTA Whatman paper and M3.) boiling of the sample (in-house protocol), being the first one the most sensitive when used in diagnostic PCR, detecting up to 2x102 leptospiras/mL. The methodology proposed in this study turned out to have good performance for the detection of leptospires in animal clinical samples, although it should be applied to a greater number of samples and in different stages of the pathology.