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dc.contributor.author
Corradi, Gerardo Raul
dc.contributor.author
Mazzitelli, Luciana Romina
dc.contributor.author
Petrovich, Guido Daniel
dc.contributor.author
Grenon, Paula
dc.contributor.author
Sørensen, Danny M.
dc.contributor.author
Palmgren, Michael
dc.contributor.author
de Tezanos Pinto, Felicitas
dc.contributor.author
Adamo, Hugo Pedro
dc.date.available
2021-09-20T15:57:37Z
dc.date.issued
2020-04
dc.identifier.citation
Corradi, Gerardo Raul; Mazzitelli, Luciana Romina; Petrovich, Guido Daniel; Grenon, Paula; Sørensen, Danny M.; et al.; Reduction of the P5A-ATPase Spf1p phosphoenzyme by a Ca2+-dependent phosphatase; Public Library of Science; Plos One; 15; 4; 4-2020; 1-17
dc.identifier.issn
1932-6203
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/140884
dc.description.abstract
P5 ATPases are eukaryotic pumps important for cellular metal ion, lipid and protein homeostasis; however, their transported substrate, if any, remains to be identified. Ca2+ was proposed to act as a ligand of P5 ATPases because it decreases the level of phosphoenzyme of the Spf1p P5A ATPase from Saccharomyces cerevisiae. Repeating previous purification protocols, we obtained a purified preparation of Spf1p that was close to homogeneity and exhibited ATP hydrolytic activity that was stimulated by the addition of CaCl2. Strikingly, a preparation of a catalytically dead mutant Spf1p (D487N) also exhibited Ca2+-dependent ATP hydrolytic activity. These results indicated that the Spf1p preparation contained a co-purifying protein capable of hydrolyzing ATP at a high rate. The activity was likely due to a phosphatase, since the protein i) was highly active when pNPP was used as substrate, ii) required Ca2+ or Zn2+ for activity, and iii) was strongly inhibited by molybdate, beryllium and other phosphatase substrates. Mass spectrometry identified the phosphatase Pho8p as a contaminant of the Spf1p preparation. Modification of the purification procedure led to a contaminant-free Spf1p preparation that was neither stimulated by Ca2+ nor inhibited by EGTA or molybdate. The phosphoenzyme levels of a contaminant-free Spf1p preparation were not affected by Ca2+. These results indicate that the reported effects of Ca2+ on Spf1p do not reflect the intrinsic properties of Spf1p but are mediated by the activity of the accompanying phosphatase.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
eng
dc.publisher
Public Library of Science
dc.rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject
Spf1p
dc.subject
P5-ATPASE
dc.subject
PHOSPHOENZYME
dc.subject
Ca2+ DEPENDENT PHOSPHATASE
dc.subject.classification
Bioquímica y Biología Molecular
dc.subject.classification
Ciencias Biológicas
dc.subject.classification
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
dc.title
Reduction of the P5A-ATPase Spf1p phosphoenzyme by a Ca2+-dependent phosphatase
dc.type
info:eu-repo/semantics/article
dc.type
info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated
2021-09-07T19:20:40Z
dc.journal.volume
15
dc.journal.number
4
dc.journal.pagination
1-17
dc.journal.pais
Estados Unidos
dc.journal.ciudad
San Francisco
dc.description.fil
Fil: Corradi, Gerardo Raul. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina
dc.description.fil
Fil: Mazzitelli, Luciana Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina
dc.description.fil
Fil: Petrovich, Guido Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina
dc.description.fil
Fil: Grenon, Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina
dc.description.fil
Fil: Sørensen, Danny M.. Universidad de Copenhagen; Dinamarca
dc.description.fil
Fil: Palmgren, Michael. Universidad de Copenhagen; Dinamarca
dc.description.fil
Fil: de Tezanos Pinto, Felicitas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina
dc.description.fil
Fil: Adamo, Hugo Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina
dc.journal.title
Plos One
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://dx.plos.org/10.1371/journal.pone.0232476
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0232476
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