Optimización en el aislamiento y purificación de capsaicina a partir de especies del género Capsicum Annum L.

Abstract

Los pimientos picantes se usan en todo el mundo como condimento debido a su sabor pungente. En el uso popular se les atribuyen diversas propiedades medicinales, entre ellas está científicamente comprobada la efectividad de los capsaicinoides en el alivio dedolores musculares. Estos pimientos pertenecen a un grupo de plantas nativas de América del género Capsicum (Solanaceae). En Argentina crecen naturalmente Capsicum baccatum L. y C. chacoense Hunz. Su típico sabor picante se debe a la presencia decapsaicinoides, de los cuales la capsaicina (C) es el más abundante. Tanto su biosíntesis como la acumulación en los tejidos del fruto son rasgos genéticamente determinados y regidos exclusivamente por un gen llamado Pun 1 que, en estado dominante sintetiza un a enzima involucrada en el último paso de la formación de C. En el marco de un proyecto en cooperación que propon e el estudio de lavariabilidad intraespecífica de C en poblaciones silvestres de C. chacoense y las causas que la producen, en una 1° etapa, y como objetivo de este trabajo, se aisló y purificó C a partir de C. annum L. a fin de obtener materia prima de fuente natural para posterioresdeterminaciones analíticas. Se extrajeron los frutos mediante maceración con etanol, el extracto se concentró a presión reducida y se analizó por cromatografía en capa delgada (CCD), a fin de detectar la presencia de C por comparación de los datos cromatográficoscon bibliografía. Luego, el extracto etanólico fue separado mediante cromatografía en columna empleando un gradiente de Etanol /Éter etílico (100%0%; 0% 100%) usando como fase estacionaria Sílica gel. Mediante CCD se detectaron los capsaicinoides enlas fracciones 10 a 16. Éstas se analizaron primero por HPLC a escala analítica, empleando una columna Hypersil C18 y como fases móviles: agua/acetonitrilo (90:10) conteniendo ácido fórmico al 0.1% (Fase A) y agua/acetonitrilo (10:90) (Fase B) con un flujo de 1mL/min. El programa empleado fue el siguiente: 0-55%B (0-21min), 55-64%B (21-30min), 64-100%B (30-35min), 100%B (35- 50min), 100-0%B (50-52min) y 0%B (52-70min). Este programa es una adaptación y optimización de otros sistemas ya descriptosen trabajos anteriores; así, se verificó el t de C. Posteriormente se procedió a su aislamiento mediante HPLC semipreparativa, con iguales condiciones, pero con columna Hypersil 5 C18, flujo de 3mL/min y volumen de inyección de 100µL. En ambos casos λ fuede 282 nm. Como resultado, pudieron aislarse los capsaicinoides de los demás componentes del extracto y C del resto de los capsaicinoides, merced a las modificaciones realizadas. Estos resultados presentan a nuestra metodología como una variaciónpositiva y constituyen un paso hacia el estudio de las poblaciones de C. chacoense silvestres.