Búsqueda de inhibidores de serina proteasas en glándulas accesorias del sistema reproductor masculino

Abstract

Serine protease inhibitors modulate sperm physiolo-gy through unknown mechanisms. Redundancy of molecules bearing the same activity within the male duct denotes their significance. In order to characte-rize the population of this kind of inhibitors in ac-cessory glands of the male duct, different approaches were employed to search for serine protease inhibitors in male mice tissues. Tissues with the highest acti-vities were selected from extracts enriched in tryp-sin inhibitor activity and sperm protease inhibitor activity. Proteomic tools as affinity chromatography and 1D and 2D electrophoresis followed by mass spectrometry were performed on seminal vesicle and epididymis fractions. These methodologies allowed us to identify SVS IV and SPINK3 in seminal vesi-cle and PI16 in epididymis. On the other hand, in silico search for serine protease inhibitors with pre-dicted or demonstrated expression within the male duct of Mus musculus was performed using 4 data-bases. Twenty trypsin/chemotrypsin inhibitors were found and they were classified according to their fa-milies (Merops) or their Pfam domains. The results obtained by both strategies were complementary.

Los inhibidores de serina proteasas modulan la fisiología espermática por mecanismos no conocidos. La redundancia de moléculas con actividad similar en el tracto reproductor masculino denota su importancia. Con el objetivo de caracterizar los inhibidores en glándulas accesorias del sistema reproductor masculino se realizó la búsqueda de inhibidores de serina proteasas en distintos órganos de ratón. A partir de fracciones enriquecidas en actividad inhibitoria tanto de tripsina como de proteasas espermáticas provenientes de órganos y glándulas accesorias de ratones machos, se seleccionaron aquellos tejidos con mayor actividad (vesícula seminal y epidídimo). Se emplearon distintas herramienta de proteómica para analizar estas fracciones, como cromatografía de afinidad y electroforesis en 1 y 2 dimensiones seguidas por espectrometría de masa. Este conjunto de metodologías permitió la identificación de SVS IV y SPINK3 en vesícula seminal, además de PI16 en epidídimo. Por otro lado, se realizó una búsqueda in silico de inhibidores de serina proteasas a partir de 4 bases de datos cuya expresión se ha predicho o detectado en el tracto reproductor masculino. Los 20 inhibidores de tripsina/quimotripsina que se encontraron se clasificaron según las familias MEROPS o los dominios Pfam. Los resultados de ambas estrategias fueron complementarios