Aislamiento de Leptospira borgpetersenii de fuentes de agua en Argentina

Abstract

Introducción: Las especies del género Leptospira son los agentes causales de la leptospirosis, enfermedad considerada como la zoonosis de mayor distribución en el mundo. En Argentina reviste carácter endémico. La provincia de Santa Fe registra el mayor número de casos humanos. Desde mediados de la década de 1980, las especies patógenas de leptospiras aisladas de animales y humanos fueron diferenciadas en base a estudios de hibridización ADN-ADN, surgiendo nuevas especies: L. interrogans, L. kirschneri, L. weilii, L. noguchii, L. borgpetersenii, L. santarosai, L. meyeri, L. inadai, L. faineri y L. alexanderi. Objetivo: aislar leptospiras de fuentes de agua que vierten en un canal que atraviesa la ciudad de Casilda, Santa Fe y caracterizarlas molecularmente. Métodos: se sembraron muestras de agua de las vertientes al canal previa filtración con filtros Millipore de 0,22 µm, en medios EMJH y Fletcher para aislamiento de leptospiras. Se incubaron en estufa a 30°C por más de 10 días, observándolos semanalmente mediante microscopía de campo oscuro. Se implementó la técnica de PCR para determinar si los aislamientos eran patógenos. Se realizó tipificación serológica mediante la técnica de aglutinación microscópica (MAT). La técnica molecular utilizada para genotipificar fue Multiple-Locus Variable-number tandem repeats Analysis (MLVA). Resultados: Se obtuvieron 5 aislamientos de Leptospira spp. de los cuales 2 resultaron positivos a la PCR, determinando que se trataba de leptospiras patógenas. Ninguno de los aislamientos se logró tipificar serológicamente. Mediante la genotipificación por MLVA se pudo observar que uno de los aislamientos patógenos mostró un patrón correspondiente a la especie L. borgpetersenii. El resto no mostró un perfil identificable. Conclusiones: En la ciudad del estudio, que tiene alrededor de 40.000 habitantes, se logró identificar por primera vez una cepa de L. borgpetersenii de fuentes de agua urbanas, con el peligro potencial que esto representa para la población humana y animal.

Introduction: the Leptospira genus species are causative agents of leptospirosis, a disease that is considered the most widely spread zoonotic disease worldwide. In Argentina, leptospirosis is endemic and Santa Fe province has the highest number of human cases. Since mid-1980's, the pathogenic leptospira species isolated from animals and humans have been differenciated through DNA-DNA hybridization tests, resulting in new species: L. interrogans, L. kirschneri, L. weilii, L. noguchii, L. borgpetersenii, L. santarosai, L. meyeri, L. inadai, L. faineri y L. alexanderi. Objectives: to isolate and to characterize by molecular test leptospiras from water poured into a channel that runs through Casilda City in Santa Fe Province, Argentina. Methods: six samples of water from the channel were cultured after having been filtered through 0.22 µm, Millpore filtres in EMJH and Fletcher media to isolate leptospires. They were incubated at 30 °C for 15 days, and weekly observed through dark field microscopy. Polymerase chain reaction assay was used under specific conditions (Sugathan, 2005), with two sets of primers (Gravekamp, 1993), to determine whether the isolates were pathogenic. The molecular technique for genotyping was Multiple-Locus Variable-number tandem repeats Analysis (MLVA). Results: five Leptospira spp. isolates were obtained of which 2 were positive to PCR, all of which determined that they were pathogenic leptospiras. MLVA genotyping allowed the observation of a pattern similar to that of L. borgpetersenii species in one pathogenic isolates, but the other isolate was not identified. Conclusions: in the City where the study was carried out, with a population of about 40,000 inhabitants, a L. borgpetersenii species was identified for the first time in urban water sources, with the potential risk that it may pose for human and animal populations.