Estructura poblacional y caracterización genética de los factores de patogenicidad de cepas de Clavibacter michiganensis SUBSP michiganensis, presentes en el Cinturón Verde de Buenos Aires - La Plata

Abstract

El cancro y marchitamiento bacteriano, causado por Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, es considerada una de las enfermedades bacterianas más graves del tomate. En Buenos Aires puede alcanzar 100 % de incidencia al final del cultivo. El objetivo de este trabajo fue caracterizar genéticamente y según su agresividad poblaciones de C. michiganensis subsp. michiganensis del cinturón verde de Buenos Aires-La Plata. Se analizaron en total 56 aislamientos procedentes de plantas enfermas, de semillas importadas, y dos cepas de referencia, NCPPB382 y NCPPB399. Los aislamientos se caracterizaron por BOX-PCR, la presencia de los plásmidos y los genes de patogenicidad presentes en los mismos y en la isla de patogenicidad del cromosoma, identificados en la cepa NCPPB382. Estos datos se relacionaron con la agresividad de las cepas. Los aislamientos locales y de semilla se distribuyeron en tres grupos de BOX-PCR con un 88 % de similitud. Ninguna de las cepas locales se agrupó con NCPPB382. No se encontró relación entre los grupos genéticos y la finca, localidad o año de aislamiento de las cepas, lo que sugiere que las fuentes de inóculo fueron diversas. En ocasiones, cepas obtenidas en diferentes años de un mismo invernadero correspondieron a un mismo grupo genético. La agresividad de las cepas fue muy variable dentro de cada grupo de BOX-PCR, y no hubo diferencias entre grupos. Pese a esto, todos los aislamientos amplificaron todos los productos esperados para los genes de patogenicidad. Mientras que el pCM2 parece estar muy conservado en las cepas locales, el pCM1 estaría asociado con el grupo genético III. Los datos presentados sugieren que cepas introducidas en las semillas pueden estar conviviendo con otras que sobreviven localmente. Los genes de patogenicidad analizados están muy conservados; aquellos presentes en los plásmidos de NCPPB382 pueden encontrarse en otros plásmidos o en el cromosoma.

Bacterial wilt and canker, caused by Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, is considered one of the most important diseases of tomato worldwide. In Buenos Aires it can reach up to 100 % incidence at the end of the crop season. The objective of this work was to characterize genetically and by their aggressiveness some C. michiganensis subsp. michiganensis strains from the Buenos Aires-La Plata green belt. We analyzed a total of 56 strains isolated from diseased plants, imported seeds and two reference strains, NCPPB382 and NCPPB399. The isolates were characterized by BOX-PCR, the presence of plasmids, their pathogenicity genes and the ones described in NCPPB382´s chromosomal pathogenicity island. The aggressiveness of the strains was evaluated and related to their genetic characteristics. Local and seed isolates were distributed in three BOX-PCR groups with 88 % similarity. None of the local strains grouped with NCPPB382. Genetic groups were not related to the greenhouse, location or year of isolation. This suggests that there are several sources of inoculum. However, in a few cases, identical bacterial fingerprints were isolated from the same greenhouse in different years. Although aggressiveness was very variable among strains from the same genetic group, all strains amplified the expected size products of the pathogenicity genes. While pCM2 seems to be widely distributed among local strains, pCM1 seems to be associated to genetic group III. Our results suggest that new strains introduced every year by imported seed might coexist with others persisting locally. The analyzed pathogenicity genes are conserved; those present in NCPPB382 plasmids could be present in other plasmids or even in the chromosome.