Mutaciones en JAK2, MPL y CALR en neoplasias mieloproliferativas: análisis de disociación de alta resolución

Abstract

La policitemia vera (PV), la trombocitemia esencial (TE) y la mielofibrosisidiopática (MI) constituyen las Neoplasias Mieloproliferativas cromosomaFiladelfia negativas (NMP Ph-neg). La mutación V617F en el exón 14 delgen JAK2 ha sido descripta en un 90% de los casos de PV y en un 50%de TE y MI. Recientemente, se identificaron mutaciones en el exón 10del gen MPL y en el exón 9 del gen CALR, presentes en un 5 y 73% depacientes con TE y MI sin mutaciones en JAK2, respectivamente. En el presentetrabajo se estudió la detección de dichas mutaciones en 52 pacientescon NMP, mediante amplificaciones por PCR en Tiempo Real con posterioranálisis por High Resolution Melting (HRM) y secuenciación. La mutaciónV617F en JAK2 fue registrada en un 83,3% de pacientes con PV y 42,8%con TE y MI. Un 6,25% y 56,25% de pacientes con TE y MI JAK2 negativosresultaron positivos para mutaciones en el exón 10 de gen del receptorde la trombopoyetina (MPL) y el exón 9 de gen de la calreticulina (CALR).El análisis por HRM puede ser considerado como herramienta diagnósticaeficaz para las NMP debido a su alta sensibilidad, bajo costo y tiempo deprocesado, teniendo en cuenta el impacto clínico que podría tener en los pacientes la detección temprana de dichas mutaciones.

Polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (TE) and idiopathic myelofibrosis (MI) are Philadelphia chromosome–negative myeloproliferative neoplasms (MPN-Ph. Neg). The presence of the V617F mutation in exon 14 of the JAK2 gene has been described in 90% of cases of PV and 50% of MI and TE. Recently, mutations in exon 10 of the MPL gene and exon 9 of CALR gene have been identified, which are present in 5 to 73% of patients with TE and MI without mutations in JAK2, respectively. In this work, the detection of these mutations was studied in 52 patients with NMP, using real time PCR amplifications with subsequent High Resolution Melting (HRM) analysis and sequencing. A total of 83.3% of patients with PV and 42.8% with MI and TE were recorded as positive for the V617F mutation in JAK2. A total of 6.25% and 56.25% of the patients with MI and TE with non-mutated JAK2 were positive for mutations in MPL exon 10 and CALR exon 9. HRM analysis could be considered an effective diagnostic tool for NMP due to its high sensitivity, low cost and processing time, taking into account the clinical impact that early detection of such mutations could have on patients.

Policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose idiopática (MI) constituem as Neoplasias Mieloproliferativas cromossomo Filadélfia negativas (NMP Ph-neg). A mutação V617F no exon 14 do gene JAK2 foi descrita em 90% dos casos de PV e em 50% de TE e MI. Recentemente, foram identificadas mutações no exon 10 do gene MPL e no exon 9 do gene CALR, presentes em 5 a 73% de pacientes com TE e MI sem mutações em JAK2, respectivamente. Neste trabalho foi estudada a detecção de tais mutações em 52 pacientes com NMP, usando amplificações por PCR em Tempo Real, com posterior análise por High Resolution Melting (HRM) e sequenciamento. 83,3% dos pacientes com PV e 42,8% com TE e MI foram positivos para a mutação V617F em JAK2. 6,25% e 56,25% de pacientes com TE e MI JAK2 negativo foram positivos para mutações no exon 10 de gene do receptor da trombopoietina (MPL) e o exon 9 de gene da calreticulina (CALR). A análise por HRM pode ser considerada como ferramenta de diagnóstico eficaz para as NMP, devido à sua alta sensibilidade, baixo custo e tempo de processamento, tendo em conta o impacto clínico que poderia ter a detecção precoce de tais mutações nos pacientes.