Evaluación de la inhibición de esporas de Trichoderma sp. por cepas de Bacillus sp. y Pseudomonas sp. para su potencial uso en biocontrol de la enfermedad del moho verde en fungicultura

Abstract

La rentabilidad del cultivo de gírgolas (Pleurotus ostreatus) es afectada por la aparición de mohos oportunistas. La de mayor incidencia es la llamada “enfermedad del moho verde”, provocada por Trichoderma spp., que ocasiona importantes pérdidas en la producción. El control químico está desaconsejado debido a la aparición de resistencias en los patógenos, además del riesgo sanitario y ambiental involucrado. Una alternativa es el empleo de microorganismos antagonistas y/o sus metabolitos. En estudios previos se aislaron cepas bacterianas provenientes de sustrato a base cáscara de semilla de girasol utilizado en el cultivo de gírgolas en el sudoeste bonaerense. Los aislamientos denominados B 9.1b, B 9.3 correspondientes a Bacillus sp. y PsC, identificado como Pseudomonas sp. del grupo fluorescente, se seleccionaron por exhibir una importante actividad inhibitoria frente al crecimiento de Trichoderma spp. Tri-CR1 (cepario CERZOS), aislado de un invernadero afectado por la enfermedad; además ninguna de ellas afectó a las cepas de P. ostreatus comerciales. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de estos aislamientos en la germinación de las esporas de Tri-CR1, debido a que ellas son el principal factor de diseminación de la enfermedad.Los ensayos se realizaron en placas de 96 pocillos estériles. Cada pocillo fue cargado con 50 µL de la suspensión de 105 esporas/ mL y 50 µL de una suspensión de bacterias (107 células/ mL), cultivada en caldo extracto cáscara girasol (CSG) ó 50 µL del sobrenadante de cultivo libre de células, obtenidos por filtración con membrana de 0,22 µm de poro. Los tratamientos fueron: 1) suspensión de esporas + suspensión bacteriana; 2) suspensión de esporas + filtrados libres de células; 3) suspensión de esporas + caldo CSG estéril (control). Se realizaron 6 réplicas por tratamiento. Las placas se incubaron 8 h a 25 °C. Las esporas germinadas y las no germinadas fueron cuantificadas con una cámara de Neubauer en microscopio light Zeiss Primo Star iLED, equipado con una cámara HD y software MTB. Un conidio se consideró germinado cuando el largo del tubo germinal fue al menos 1,5 veces el diámetro de la espora. Se calculó el porcentaje de esporas germinadas (%SG).Se observó que el aislamiento B 9.3 fue capaz de inhibir la germinación del 90% de las esporas y que PsC inhibió la germinación del 99%. La cepa B 9.1b no presentó diferencias significativas con los controles (p<0,05). Cuando se aplicó los filtrados libres de células, PsC mostró inhibir el 40% de las esporas, pero no se observaron efectos significativos con los sobrenadantes de B 9.3. La diferencia observada puede deberse a la baja concentración de compuestos en el medio y/o a factores ligados a la superficie celular. Los aislamientos 9.3 y PsC mostraron capacidad de inhibir la germinación de conidios de Tri-CR1 y justifica continuar los estudios para evaluar su aplicación en el sustrato de cultivo de gírgolas a fin de reducir la ocurrencia del moho verde.