Detección de variantes de toxina Shiga mediante un Elisa de captura con anticuerpos de pollo

Abstract

El Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) es una enfermedad multisistémica caracterizada por la tríada: insuficiencia renal aguda, anemia hemolítica microangiopática y trombocitopenia. Argentina presenta la mayor incidencia a nivel mundial de esta patología, con aproximadamente 500 casos anuales en niños menores de 5 años. El principal agente etiológico del SUH es Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC). Esta toxina (Stx) es liberada por la bacteria y constituye su principal factor de virulencia. Existen 2 tipos de Stx, Stx1 y Stx2, y de este último hay numerosas variantes, algunas de las cuales están asociadas a una mayor severidad en la enfermedad. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un ELISA de captura para detectar la presencia de Stx2. Se obtuvieron anticuerpos mediante inmunización de pollos y conejos con la subunidad B recombinante de Stx2. Los anticuerpos de pollo (IgY), purificados a partir de la yema de huevo, se emplearon como anticuerpos de captura y los Ac de conejo (IgG) se conjugaron con peroxidasa y se utilizaron como anticuerpos de detección. Se ensayaron 11 sobrenadantes de cultivos de aislamientos de STEC que presentaban las variantes Stx2EDL933 (n=4), Stx2vha (n=2), Stx2vhb (n=2), Stx2g (n=1). La producción de toxina durante el cultivo se indujo con mitomicina C (0,5 ug/ml). Como controles negativos se emplearon los sobrenadantes de 2 cepas de E. coli no productoras de toxina. El cut off se calculó como 2 veces la DO a 450 nm de los controles negativos. Las muestras fueron testeadas por duplicado. Todos los sobrenadantes ensayados fueron positivos. Dado que el rendimiento de IgY total fue de 8,4 mg por huevo, y considerando que utilizamos 135 ug de IgY total por placa de ELISA, esto representa una gran cantidad de anticuerpo disponible a un bajo costo. En conclusión, los anticuerpos anti-Stx2B de pollo y conejo reconocieron diferentes variantes de Stx2 en un ELISA de captura. Se plantea de esta forma, una alternativa económica y efectiva para ser utilizada en el futuro para el diagnóstico rápido de la presencia de STEC.