Evaluación de la diversidad genética de Streptococcus agalactiae aislado de vacas con mastitis mediante MLVA (Multiple Loci VNTR Analysis)

Abstract

La mastitis bovina causada por Streptococcus agalactiae representa un serio problema económico para la industria láctea, especialmente porque este microorganismo es altamente contagioso dentro de un tambo y, reduce notablemente la producción de leche. Las cepas de S. agalactiae poseen diferencias en los polisacáridos de la cápsula, lo cual determina 10 serotipos (Ia/Ib–IX). Sin embargo, la serotipificación tiene un bajo poder discriminatorio para investigar la relación entre cepas. Una de las herramientas disponibles para la evaluación epidemiológica de S. agalactiae es el análisis de múltiples loci VNTR (repetición en tándem de número variable) o MLVA. El objetivo fue poner a punto un ensayo de MLVA que permitiera evaluar la diversidad genética de cepas nativas de S. agalactiae y aplicarlo para analizar 65 cepas obtenidas de vacas con mastitis, entre 2016 y 2021, provenientes de tambos de la cuenca lechera Mar y Sierras. Para ello se amplificaron por PCR 6 loci VNTR propuestos para S. agalactiae. Los productos de las amplificaciones se analizaron mediante electroforesis en geles de agarosa teñidos con bromuro de etidio. El genotipo MLVA de una cepa se expresó como su perfil alélico, SAG2, SAG3, SAG4, SAG7, SAG21, SAG22. Todas las muestras pudieron ser tipificadas por este ensayo de MLVA. El análisis de agrupamiento reveló 28 genotipos, 15 de ellos, únicos. El número de alelos detectado por locus varió entre 2 (SAG21) y 5 (SAG4, SAG22), siendo los marcadores SAG4 y SAG22 los que presentaron mayores índices de diversidad de Nei (DN= 0.78 y DN= 0.67, respectivamente). Por otra parte, el índice de diversidad genética de Simpson para el método fue DS= 0.94, lo cual significa que esta metodología presenta un muy alto poder de discriminación. Los resultados muestran que este ensayo de MLVA, simple, rápido y de bajo costo, es útil y muy recomendable para estudiar relaciones epidemiológicas entre cepas nativas de este patógeno. Mediante el mismo se detectó una importante diversidad genética presente entre los aislamientos de S. agalactiae provenientes de vacas con mastitis de diferentes tambos como así, también, la presencia de distintos clones dentro de uno de los tambos incluido en este estudio.