Evaluación analítica del kit Tc Loopamp LAMP para el diagnóstico rápido de la infección por Trypanosoma cruzi empleando distintos sistemas de extracción a partir de muestras sanguíneas en diferentes soportes

Abstract

El control de la transmisión materno-fetal del Trypanosoma cruzi, causante de Chagas congénito (ChCg), es prioridad en salud pública. En los recién nacidos con ChCg, los medicamentos disponibles logran una alta tasa de curación si se administran a edad temprana. Alrededor del 50% de estos niños no se detectan al nacer debido a la baja sensibilidad (Se) de las técnicas parasitológicas o porque una gran proporción no regresa para la confirmación serológica a los 9 meses, por lo que es crucial diagnosticarlos a tiempo. Con el objetivo de implementar un diagnóstico temprano basado en la amplificación isotérmica mediada por asas (LAMP) adecuado para laboratorios mínimamente equipados, evaluamos la Se y especificidad (Sp) utilizando dos métodos de extracción de ADN simples a partir de muestras de sangre entera o en tarjetas FTA y Whatman 903 (W903) contaminadas con las cepas Silvio-X10 (Tc I) o CLBrener (Tc VI). Las condiciones óptimas se determinaron utilizando 20 muestras independientes para cada condición. El Límite de Detección LoD 95 se definió como la concentración de carga parasitaria más baja a la que 19 de 20 réplicas dan un resultado positivo de LAMP. Según el tipo de muestra y la cepa analizada el LoD varió entre 5 a 20 par/mL utilizando el sistema Loopamp PURE para obtener el ADN parasitario, con una Sp del 100% para muestras de sangre en heparina o en FTA, y del 80% en W903. Un LoD de 5 par/mL y Sp de 85% se obtuvo para ambas cepas en sangre heparinizada utilizando el robot PrintrLab, modificado de una impresora 3D, con kit de extracción de ADN basado en partículas magnéticas. Contrariamente, por este método no se lograron resultados positivos con tarjetas FTA o W903. En base a las condiciones probadas, observamos que el uso de sangre heparinizada congelada extraída por el sistema Loopamp PURE seguido de LAMP arroja resultados óptimos en términos de robustez, reproducibilidad, tiempo de procesamiento con valores adecuados de Se y Sp analíticas.